IFN-λ1-3 mRNA实时荧光定量PCR方法的建立及IFN-λ1的表达与呼吸道病原关系的初探

发布时间：2017-04-18 11:08

  本文关键词：IFN-λ1-3 mRNA实时荧光定量PCR方法的建立及IFN-λ1的表达与呼吸道病原关系的初探，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分IFN-λ1-3mRNA实时荧光定量PCR方法的建立目的：建立人IFN-λ1.3型mRNA实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法。方法：根据人IFN-λ1-3型mRNA的基因序列合成特异性引物及探针,用体外转录方法制备IFN-λ1-3的mRNA标准品,建立人IFN-λ1-3型mRNA实时荧光定量PCR检测方法。结果：IFN-λ1-3型mRNA的载量与对应的CT值有良好的线性关系；扩增效率均在90%-100%之间；灵敏度分别是：1×100copies/μL、 1×101copies/μL、1×101copies/μL;变异系数均小于2%；各型问无交叉反应。结论：成功建立了IFN-λ1-3型mRNA实时荧光定量PCR检测方法。第二部分IFN-λ1的表达与呼吸道病原的关系的初探目的：了解呼吸道上皮细胞中IFN-λ1表达水平与呼吸道病原之间的关系,为开拓儿童呼吸道病毒感染新的治疗方法提供基础数据和科学根据。方法：1.采集郴州地区2013年7月～2014年6月为期一年间就诊于郴州市第一人民医院儿科的急性呼吸道感染住院患儿鼻咽拭子标本共489份,并按照年龄及标本采集日期配对的原则,同时在该院儿保门诊收集健康儿童鼻咽拭子244份为设为对照组,将收集的鼻咽拭子加入2ml病毒保存液并置于-80℃冰箱保存。2.采用所建立的荧光定量PCR方法检测样本中IFN-λ1 mRNA、管家基因甘油醛-3-磷酸脱酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase GAPDH)mRNA,另外同时对本批标本进行常见病原(常见呼吸道病毒18种,细菌11种)进行筛查。3.比较不同病原感染患儿鼻咽拭子标本中IFN-λ1的表达差异。结果：1. 病例组中IFN-λ1表达水平明显高于对照组(t=2.276P=0.027)。2. 病毒感染病例中IFN-λ1的总体表达水平与正常对照组无显著差异(t=0.57 P=0.57),但是RSV感染的病例中IFN-λ1的表达量明显高于正常对照组(t=2.25 P=0.026),IFN--λ1的表达量与RSV的载量无明显相关性(r=0.12 P=0.41)。3.检出HRV感染的病例组中IFN-λ1的表达量较检出HRV感染的对照组显著明显升高(t=2.8 P=0.015)。4.RSV感染的病例中IFN-λ1的表达量较HRV显著升高(t=2.19P=0.045)。5.细菌感染病例IFN-λ1表达水平与正常对照组比较无显著差异(t=0.17 P=0.87)。结论：1.IFN-λ1参与了呼吸道病毒感染的发病过程；2.RSV可以诱导IFN-λ1表达且强于HRV；3.呼吸道细菌感染可能对IFN-λ1表达无明显诱导作用。
【关键词】：IFN-λmRNA 荧光定量PCR 呼吸道病原 儿童
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文缩略词表13-15
• 第一部分 IFN-λ1-3 mRNA实时荧光定量PCR方法的建立15-29
• 前言15-16
• 1.1 实验仪器与耗材16-17
• 1.2 实验试剂17
• 1.3 实验方法17-24
• 1.4 结果24-27
• 1.5 讨论27-28
• 1.6 结论28-29
• 第二部分 IFN-λ1的表达与呼吸道病原的关系29-44
• 前言29-32
• 2.1 研究对象、标本采集、材料32-33
• 2.2 实验方法33-35
• 2.3 统计方法35
• 2.4 结果35-41
• 2.5 讨论41-44
• 2.6 结论44
• 本实验的不足之处44
• 展望44-45
• 参考文献45-49
• λ干扰素的概况及与呼吸道病毒之间的研究进展(文献综述)49-57
• 参考文献54-57
• 附录57-61
• 作者攻读学位期间的科研成果61-63
• 致谢63

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本文编号：314727