艰难梭状芽孢杆菌在喘息儿童粪便中的变化及免疫相关性的探讨

发布时间：2017-04-23 19:04

  本文关键词：艰难梭状芽孢杆菌在喘息儿童粪便中的变化及免疫相关性的探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过实时荧光定量PCR技术，检测喘息儿童肠道粪便中艰难梭状芽胞杆菌的含量，同时采用ELISA方法，，检测喘息儿童血清中IL-2及IL-4浓度，以探讨毛细支气管炎（简称毛支）与支气管哮喘发作期（简称哮喘发作）两种疾病与艰难梭状芽孢杆菌的相关性，并试图阐释毛支与哮喘发作患儿免疫机制的改变。 方法：实验组：所需粪便及血液样本来源于2013年10月-2014年10月，吉林大学白求恩第一医院小儿呼吸一科，住院毛支患儿及哮喘发作患儿。对照组：粪便样本及血液来源于相同时间，吉林大学白求恩第一医院儿外科无感染先天性畸形，如疝气、鞘膜积液等疾病患儿。实验组中毛支患儿66例，哮喘发作患儿20例；对照组患儿68例。应用试剂盒提取粪便样本中总DNA，选择艰难梭状芽胞杆菌特异性基因16S rRNA作为扩展区，设计该菌的特异性引物。在常规PCR扩增出目的片段的基础上，进行回收纯化，提高DNA回收量，测定模板浓度，用作标准品。应用SYBR Green Ⅰ染料法，对待测样品中艰难梭状芽胞杆菌含量进行定量分析。使用GraphPad Prism5软件进行统计学分析。使用ELISA试剂盒，按照说明书的具体步骤对留取的实验组及对照组全部血清进行IL-2及IL-4检测，并使用curve expert1.4统计学分析，探讨艰难梭状芽孢杆菌在喘息儿童粪便中的变化及儿童毛支与哮喘发作期免疫机制的改变。 结果： 1.实时荧光定量PCR技术可检测出人体肠道粪便中艰难梭状芽孢杆菌的含量，并且特异性强、重复性好、灵敏度高。 2.毛细支气管炎患儿粪便中艰难梭状芽胞杆菌含量与对照组相比升高p＝0.0349，有统计学意义。 3.支气管哮喘发作期患儿粪便中艰难梭状芽胞杆菌含量与正常对照组相比升高p＝0.044，有统计学意义。 4.毛细支气管炎患儿与支气管哮喘发作期患儿粪便中艰难梭状芽胞杆菌含量相比无明显变化p＝0.7219。 5.毛细支气管炎及支气管哮喘发作期患儿血清内IL-2水平与对照组相比升高p＝0.0224，有统计学意义。 6.毛细支气管炎及支气管哮喘发作期患儿血清内IL-4水平与对照组相比升高p＝0.0373，有统计学意义。 结论： 1.本实验所使用的实时荧光定量PCR技术特异性强、重复性好，适于对人肠道粪便中艰难梭状芽胞杆菌含量的检测。 2.毛细支气管炎患儿及支气管哮喘患儿肠道内梭状芽胞杆菌含量较正常对照组含量明显增多，提示提示艰难梭状芽胞杆菌含量的增加可能与喘息性疾病相关。 3.毛细支气管炎与支气管哮喘患儿肠道内艰难梭状芽孢杆菌含量无明显变化，推测二者可能是一种疾病的不同阶段。 4.艰难梭状芽孢杆菌数量的增多可能与毛细支气管炎与支气管哮喘患儿血清内IL-2、IL-4浓度升高有关。
【关键词】：实时荧光定量PCR 艰难梭状芽胞杆菌 毛细支气管炎 支气管哮喘 Th1/Th2
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文缩略词8-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 综述12-17
• 2.1 哮喘及发病机制12-13
• 2.2 毛细支气管炎及发病机制13
• 2.3 肠道菌群的简介及研究现状13-14
• 2.4 艰难梭状芽孢杆菌14-15
• 2.5 影响肠道菌群定植的因素15
• 2.6 肠道菌群与各种疾病的相关性15-16
• 2.7 展望16-17
• 第3章 资料与方法17-25
• 3.1 研究对象17
• 3.1.1 入选标准17
• 3.1.2 排除标准17
• 3.2 主要试剂及仪器17-18
• 3.2.1 实验所需试剂盒及试剂17-18
• 3.2.2 实验所需仪器18
• 3.3 实验方法18-23
• 3.3.1 便标本定量 PCR 实验方法18-20
• 3.3.2 血标本 LISA 实验方法20-23
• 3.4 研究内容23
• 3.5 观察指标23-24
• 3.5.1 ELISA 结果观察指标24
• 3.6 统计学处理24-25
• 第4章 结果25-31
• 4.1 实时荧光定量 PCR 结果25-28
• 4.1.1 试剂盒提取粪便 DNA 结果25
• 4.1.2 定量 PCR 标准曲线的评价25-26
• 4.1.3 扩增曲线-灵敏度评价26
• 4.1.4 稳定性评价26-27
• 4.1.5 溶解曲线--特异性评价27
• 4.1.6 喘息患儿粪便内艰难梭状芽孢杆菌定量结果27-28
• 4.2 试剂盒检测 IL-2 及 IL-4 结果28-31
• 4.2.1 IL-2 标准曲线的制作28-29
• 4.2.2 IL-2 统计学结果分析29
• 4.2.3 IL-4 标准曲线的制作29-30
• 4.2.4 IL-4 统计学结果分析30-31
• 第5章 讨论31-36
• 第6章 结论36-37
• 参考文献37-41
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果41-42
• 致谢42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 刘晶晶;袁耀宗;;难辨梭状芽孢杆菌与炎症性肠病[J];国际消化病杂志;2010年01期

2 项红霞;赵德育;;呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿尿白三烯测定及临床意义[J];临床儿科杂志;2008年01期

3 管远志;;肠道菌群及其生物学意义[J];临床儿科杂志;2009年11期

4 张蕴芳;汪丽萍;陈光福;;婴儿喂养方式与儿童支气管哮喘关联性的meta分析[J];临床儿科杂志;2013年02期

  本文关键词：艰难梭状芽孢杆菌在喘息儿童粪便中的变化及免疫相关性的探讨，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：322850