七味白术散对轮状病毒感染乳鼠屏障功能保护作用的实验研究

发布时间：2017-04-30 02:07

  本文关键词：七味白术散对轮状病毒感染乳鼠屏障功能保护作用的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的轮状病毒感染小鼠的机制及产生腹泻的发病原因还未得到明确证实。建立成功的乳鼠感染轮状病毒腹泻模型,在此基础上研究七味白术散对感染轮状病毒乳鼠免疫功能的调节,对小肠粘膜的生物屏障、机械屏障和免疫屏障功能的影响,轮状病毒的清除率及乳鼠临床症状的改善。同时,研究七味白术散对轮状病毒SA-11株在MA104细胞上复制的影响。材料与方法轮状病毒在MA104细胞上培养和传代,提高病毒毒力,采用荧光灶试验检测病毒滴度。将5日龄的Balb/c乳鼠接种滴度为4.5×107FFU/mL的轮状病毒50 μ L,建立腹泻模型。设立正常对照组,感染后分模型组、七味白术散组和病毒唑组,经口灌胃给药,连续5日,测定血清中IFN-γ、sIgA和小肠粘液中sIgA的含量,观察乳鼠的腹泻情况和体重变化,ELISA检测粪便中RV抗原,判断其对病毒的清除率。做石蜡切片用HE染色观察小肠绒毛病理变化。采用MTT和CPE的实验方法评价七味白术散对轮状病毒SA-11在MA104细胞上复制的作用。结果轮状病毒感染乳鼠的腹泻率和腹泻天数降低,粪便中RV抗原检测阳性,证明轮状病毒感染乳鼠模型的成功建立。荧光灶试验方法能相对准确的测定病毒滴度。七味白术散能增加感染轮状病毒乳鼠血清中IFN-γ、sIgA和小肠粘液中SIgA的含量,增强其免疫功能,减轻小鼠小肠绒毛的病理改变,恢复其屏障功能。有效缓解轮状病毒感染乳鼠腹泻、脱水症状,加快病毒从小肠的清除,降低腹泻率、减少腹泻天数。七味白术散在低浓度无细胞毒性的情况下可以促进细胞生长,对轮状病毒SA-11株在MA104细胞上的复制有一定的抑制作用。结论本研究成功建立了轮状病毒感染乳鼠模型,并在此实验基础上,做了七味白术散对婴幼儿腹泻的疗效评价,针对其对小肠粘膜屏障功能的保护和恢复作用给予证实。七味白术散的体内外实验充分证明了其在抗轮状病毒感染中的有效作用。
【关键词】：七味白术散 轮状病毒 腹泻
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.1
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一章 文献综述12-23
• 1.1 概述12-21
• 1.1.1 轮状病毒的结构12
• 1.1.2 轮状病毒的感染机制12-13
• 1.1.3 轮状病毒感染的免疫反应13-18
• 1.1.4 抗轮状病毒感染药物研究进展18-21
• 1.2 七味白术散抗轮状病毒研究进展21-23
• 1.2.1 婴幼儿腹泻的中医病机21-22
• 1.2.2 七味白术散抗轮状病毒机理研究现状22-23
• 第二章 MA104细胞的培养、传代及生长曲线23-25
• 2.1 实验材料23
• 2.1.1 细胞株23
• 2.1.2 实验试剂23
• 2.1.3 仪器与设备23
• 2.2 方法23-24
• 2.2.1 MA104细胞的复苏23
• 2.2.2 MA104细胞的传代23
• 2.2.3 测定MA104细胞生长曲线23-24
• 2.2.4 统计学分析24
• 2.3 结果24
• 2.3.1 MA104细胞生长曲线24
• 2.4 讨论24-25
• 第三章 七味白术散对轮状病毒SA11株在细胞上复制的抑制作用25-29
• 3.1 实验材料25
• 3.1.1 细胞株和病毒25
• 3.1.2 药物25
• 3.1.3 实验试剂25
• 3.1.4 仪器与设备25
• 3.2 方法25-27
• 3.2.1 药物的细胞毒性实验25-26
• 3.2.2 药物对病毒吸附细胞的影响26
• 3.2.3 药物对病毒的直接抑制作用26
• 3.2.4 药物对病毒合成的影响26
• 3.2.5 统计学分析26-27
• 3.3 结果27-28
• 3.3.1 七味白术散对MA104细胞的毒性作用27
• 3.3.2 药物对病毒吸附细胞的影响27
• 3.3.3 药物对病毒的直接抑制作用27-28
• 3.3.4 药物对病毒合成的影响28
• 3.4 讨论28-29
• 第四章 轮状病毒滴度测定方法荧光灶试验29-32
• 4.1 实验材料29
• 4.1.1 细胞株和病毒29
• 4.1.2 实验试剂29
• 4.1.3 实验仪器29
• 4.2 方法29-30
• 4.2.1 MA1O4细胞的培养29
• 4.2.2 轮状病毒的传代与收集29
• 4.2.3 荧光灶试验测定病毒滴度29-30
• 4.2.4 TCID_(50)测定病毒滴度30
• 4.2.5 统计学分析30
• 4.3 结果30-31
• 4.3.1 荧光灶试验测定病毒滴度30-31
• 4.3.2 TCID_(50)测定病毒滴度31
• 4.3.3 荧光灶试验与TCID_(50)方法比较31
• 4.4 讨论31-32
• 第五章 轮状病毒感染乳鼠模型32-35
• 5.1 实验材料32
• 5.1.1 实验动物来源及环境32
• 5.1.2 病毒32
• 5.1.3 实验仪器32
• 5.1.4 实验试剂32
• 5.2 方法32-33
• 5.2.1 动物分组32
• 5.2.2 病毒接种32
• 5.2.3 病毒接种后观察32
• 5.2.4 乳鼠大便中RV-AG检测32-33
• 5.2.5 统计学分析33
• 5.3 结果33-34
• 5.3.1 病毒接种后乳鼠反应33
• 5.3.2 乳鼠体重变化33
• 5.3.3 乳鼠腹泻动态33-34
• 5.3.4 ELISA检测RV抗原34
• 5.4 讨论34-35
• 第六章 七味白术散对轮状病毒感染乳鼠黏膜的保护作用35-41
• 6.1 实验材料35
• 6.1.1 实验动物来源及环境35
• 6.1.2 病毒35
• 6.1.3 药物35
• 6.2 方法35-36
• 6.2.1 动物分组35
• 6.2.2 腹泻及体重动态35
• 6.2.3 血清SIgA、IFN-γ测定35
• 6.2.4 小肠粘液SIgA测定35
• 6.2.5 小肠粘膜病理改变35
• 6.2.6 统计学分析35-36
• 6.3 结果36-39
• 6.3.1 乳鼠体重动态36
• 6.3.2 乳鼠腹泻动态36
• 6.3.3 粪便中RV抗原检测36-37
• 6.3.4 血清和小肠粘液SIgA测定37-38
• 6.3.5 血清IFN-γ的测定38
• 6.3.6 小肠粘膜病理改变38-39
• 6.4 讨论39-41
• 结语41-42
• 参考文献42-46
• 附录46-49
• 致谢49

【参考文献】

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1 张华玲;周赛男;蔡莹;郭抗萧;佘颜;谭周进;蔡光先;;超微七味白术散对菌群失调腹泻小鼠小肠黏膜的影响[J];中国微生态学杂志;2013年01期

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本文编号：336020