中国札如病毒的流行特征及诺如病毒GⅡ.17不同毒株P蛋白的唾液结合分析

发布时间：2017-05-11 02:01

  本文关键词：中国札如病毒的流行特征及诺如病毒GⅡ.17不同毒株P蛋白的唾液结合分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究一2012-2014年中国八省区5岁以下儿童中札如病毒检测分析目的:了解2012-2014年中国部分地区5岁以下腹泻儿童中札如病毒的分子流行病学特征,明确我国近年来札如病毒的优势基因型,对我国札如病毒的进化机制研究提供依据。方法:2012年1月至2014年12月收集河北、山西、内蒙、黑龙江、上海、湖南、四川和新疆八个地区共3175例5岁以下儿童腹泻病例粪便标本和流行病学资料;利用RT-PCR方法检测札如病毒,测定所有阳性毒株的序列并进行系统进化分析。结果:札如病毒的总阳性率为0.69%(22/3175),其中6月以下、6-12月、12-24月龄组儿童中札如病毒的阳性率分别为0.53%、0.70%、0.52%,48-60月龄组的阳性率为2.63%。2012-2014年阳性率分别为1.05%、0.38%和0.50%。系统进化分析表明以GI.1型(8株)和GII.1型(7株)札如病毒为主,其他基因型包括GI.2(2株)、GII.3(1株)、GII.4(1株)、GII.5(2株)、GIV(1株)。结论:札如病毒是我国5岁以下儿童急性胃肠炎的病原之一,GI.1和GII.1是目前的优势基因型。研究二诺如病毒GII.17不同毒株P蛋白的唾液结合分析目的:分析诺如病毒GII.17型不同变异株P蛋白与其受体组织血型抗原(HBGAs)的结合特点,探索诺如病毒GII.17新变异株得以广泛流行的原因,对诺如病毒的进化、流行乃至疫苗研制提供依据。方法:1.收集2014年广州市花都区诺如病毒GII.17新变异株暴发中183份唾液标本,以标准酶免疫(ELI)试验为基础,利用A、B、Lea、Leb、Lex、Ley和H1抗原的单克隆抗体,对其进行表型测定分析。2.从Genbank下载GII.17不同毒株41621、KW323、CS-E1的基因组序列,以其P区序列为基础,构建相应的p GEX4T-1克隆载体。3.通过构建的载体质粒表达、纯化GII.17不同毒株41621、KW323、CS-E1的P蛋白。4.用不同毒株P蛋白为免疫原免疫家兔,制备相应的抗体。5.以标准ELI试验为基础行P蛋白与不同表型唾液的结合分析。结果:1.对花都183份唾液进行表型测定分析示:病例组B抗原、Lex抗原、Ley抗原的阳性率分别为34.48%、17.24%、94.83%,对照组分别为17.91%、37.31%、76.12%;差异均有统计学意义。2.本研究成功构建了诺如病毒GII.17型三种毒株41621、KW323、CS-E1的克隆载体,表达了相应的P蛋白,并以之成功制备了多克隆抗体。3.唾液结合分析显示:41621、KW323、CS-E1三种毒株P蛋白与花都183份唾液结合的平均吸光值分别为1.637、0.9和0.142,结合呈阳性的反应数分别为166、152和40,三者之间均存在显著性差异。结论:1.对于诺如病毒GII.17型新变异株的感染,Ley抗原与B抗原为易感抗原,Lex抗原为保护性抗原。2.诺如病毒GII.17新变异株41621、KW323较之前的毒株CS-E1有着新的抗原特性,其与受体HBGAs的结合力亦较CS-E1强,这两大变化促使GII.17新变异株逃逸人群免疫,引起了急性胃肠炎的暴发流行。
【关键词】：腹泻 5岁以下儿童 札如病毒 基因型 诺如病毒 GII.17型 新变异株 P蛋白 唾液 HBGAs
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.1
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 研究一 2012-2014年中国八省区5岁以下儿童中札如病毒检测及分型8-30
• 前言8-12
• 1.1 研究方案12-13
• 1.2 材料与方法13-18
• 1.3 实验结果18-27
• 1.4 分析与讨论27-29
• 1.5 结论29-30
• 研究二 诺如病毒GⅡ.17不同毒株P蛋白的唾液结合分析30-51
• 前言30-33
• 2.1 材料与方法33-41
• 2.2 实验结果41-48
• 2.3 分析与讨论48-50
• 2.4 结论50-51
• 参考文献51-57
• 在学期间的研究成果57-58
• 致谢58

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