自噬与Wnt信号通路在胎鼠皮层神经元缺氧缺血损伤中的相互作用

发布时间：2022-07-13 13:08

　　目的探讨自噬与Wnt信号通路在神经缺氧缺血损伤中是否存在相互作用及其互相影响的机制。方法选取怀孕14~15天的SD大鼠,取胎鼠,分离皮层,进行原代细胞培养,6~8天后免疫细胞化学法鉴定神经元。将细胞分为对照组和处理组,按照分组（1,6,12,24h）进行相应时间的糖氧剥离处理。分别在（1,6,12,24h）收集细胞,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定LC3II/LC3I、P62、Beclin-1、Wnt1、Wnt3a、β-Catenin的蛋白水平表达;选用处理12 h组作为干预时间点,予自噬激动剂雷帕霉素（Rapamycin）和自噬抑制剂3-MA处理,检测Wnt1、Wnt3a、β-Catenin蛋白表达。结果1.随着糖氧剥离造模缺氧时间的延长,HIF-1α表达量逐渐增加。说明随着缺氧时间的延长,皮层神经元的缺氧缺血性损伤程度加重。缺氧时间达24h时,HIF-1α表达量最高。2.Western blot检测发现,LC3II的表达随着糖氧剥离时间的延长,逐渐增多;Beclin-1的表达与糖氧剥离时间呈正相关;p62的表达随着糖氧剥离时间的延长,逐渐减少。表明在糖氧剥离诱导的缺氧... 

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
英文摘要
缩略词表
第一章 绪论
第二章 胎鼠皮层神经元的培养及鉴定
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验对象
        2.2.2 大鼠皮层神经元细胞原代培养
        2.2.3 免疫细胞化学法鉴定神经元
    2.3 结果
第三章
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验试剂
        3.1.2 主要仪器设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 模型建立
        3.2.2 实验分组
        3.2.3 蛋白质提取
        3.2.4 蛋白电泳
        3.2.5 转膜
        3.2.6 抗体孵育
        3.2.7 蛋白质印迹检测
        3.2.8 数据统计
    3.3 结果
        3.3.1 缺氧转录因子表达与糖氧剥夺的时间依赖关系
        3.3.2 缺氧缺血损伤程度对皮层神经元细胞自噬的影响
        3.3.3 缺氧缺血神经损伤对Wnt信号通路相关蛋白表达的影响
    3.4 讨论
第四章
    4.1 实验材料
        4.1.1 主要试剂
        4.1.2 主要仪器设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 测定Wnt信号通路在皮层神经元缺氧缺血损伤过程中蛋白表达
        4.2.2 实验步骤
        4.2.3 数据统计
    4.3 实验结果
    4.4 讨论
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在学期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体自噬对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的影响[J]. 李明熹,屈艺,母得志.  中国当代儿科杂志. 2017(02)
[2]新生儿缺氧缺血性脑病发病危险因素病例对照研究[J]. 陈剑.  中国妇幼保健. 2017(04)
[3]新生儿缺氧缺血性脑病发病机制研究进展[J]. 鲁旭,姜泓,张渊韬.  新乡医学院学报. 2016(10)
[4]Wnt信号通路GSK-3β和β-catenin mRNA在胎鼠围生期脑缺血再灌注损伤中的变化[J]. 向龙,唐艺玮,毛萌,周晖.  中华妇幼临床医学杂志(电子版). 2015(05)
[5]缺氧缺血海马组织中自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达变化以及雷帕霉素对其表达的影响[J]. 李荣虎,于论,缪珀,丁欣,孙斌,冯星.  中国当代儿科杂志. 2015(04)
[6]缺血性脑损伤中的自噬——研究进展与挑战[J]. 张翔南,陈忠.  中国科学:生命科学. 2014(04)
[7]Crohn’s disease-Defect in innate defence[J]. Michael Gersemann,Jan Wehkamp,Klaus Fellermann,Eduard Friedrich Stange.  World Journal of Gastroenterology. 2008(36)



本文编号：3660098