应用RNA干扰技术抑制手足口病重要病原体的基因表达与复制研究

发布时间：2022-10-09 15:00

　　手足口病（Hand, foot, and mouth disease, HFMD）主要发病于5岁以下儿童,其主要症状为儿童的口腔黏膜、手和脚上出现水疱疹。大部分手足口病发病可自愈,少数发病可并发急性脑膜炎、脑炎和急性心肌炎甚至死亡,是近年来严重危害我国儿童健康的丙类法定报告传染病,目前尚无特效治疗药物。手足口病可由多种小RNA病毒科人肠道病毒属的病毒引起,包括柯萨奇病毒内的多种血清型（Coxsackievirus A16、A4、A5、A9、A10、B2、B5）、肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71）以及部分埃可病毒（Echo virus）。其中,肠道病毒71型（EV71）以及柯萨奇病毒A16型（CA16）是手足口病的两大最主要的病原体,在多次爆发的手足口病流行中均占主导地位。EV71感染除手足口病外可致无菌性脑膜炎、脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病等多种与神经系统相关的疾病并引起儿童的死亡。CA16感染症状较EV71感染轻,一般不引起神经系统疾病,但却可能与心肌炎、心包炎密切相关,并引起低龄儿童的死亡。 RNA干扰（RNA interference, RNAi）,是... 

【文章页数】：127 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
第一章 相关研究背景及进展
    一、手足口病的流行及防治概况
        1、国外流行概况
        2、国内流行概况
        3、防治概况
    二、柯萨奇病毒A16(Coxsackievirus A16,CA16)型研究进展
        1、病毒的分子结构
        2、病毒基因组结构
        3、病毒基因组的编码产物及其功能
        4、病毒的感染与繁殖
    三、肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)研究进展
        1、病毒的分子结构
        2、基因组结构
        3、病毒的感染与繁殖以及病毒基因组的转录和表达
    四、RNA干扰(RNA interference,RNAi)研究进展
        1、RNAi理论研究进展
        2、RNAi技术的应用
        3、RNAi在抗病毒研究中的应用
第二章 手足口病重要病原体柯萨奇病毒A16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71)中国分离株全基因组序列的测定及分析
    一、前言
    二、材料与方法
        1、实验材料
        2、实验方法
    三、实验结果与分析
        1、病毒株的获得以及接种细胞后的典型CPE
        2、病毒基因组cDNA片段的获得
        3、病毒基因组cDNA片段的测序结果
        4、病毒基因组RNA序列的拼接以及序列分析
    四、结论
第三章 抑制柯萨奇病毒A16型(CA16)复制的小干扰RNA(siRNAs)的快速筛选
    一、前言
    二、材料和方法
        1、实验材料
        2、实验方法
    三、结果与分析
        1、GeneBuster siRNAs表达质粒的构建
        2、融合siRNAs靶标基因报告质粒的构建
        3、双荧光素酶分析系统对siRNA干扰效率的测试和筛选
        4、细胞中siRNAs表达载体对CA16 strain Shzh05-1的抑制作用
    四、结论
第四章 抑制肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)复制的小干扰RNA(siRNAs)的快速筛选
    一、前言
    二、材料和方法
        1、实验材料
        2、实验方法
    三、结果与分析
        1、RD-A细胞转染化学合成的Stealth siRNA效率的摸索
        2、化学合成的Stealth siRNA在细胞水平抑制EV71病毒复制的研究
        3、siRNAs在细胞水平抑制EV71病毒复制的剂量依赖关系
        4、siRNAs抑制不同EV71分离株的效果对比
    四、结论
第五章 研究总结
参考文献
攻博期间发表的科研论文
致谢



本文编号：3688851