非成熟体序列对肺表面活性蛋白B分布及表达的影响

发布时间：2023-01-25 18:42

　　[目的]研究成熟体之外的蛋白序列对肺表面活性蛋白B（SP-B）分布和表达的影响。[方法]将人sp-b（1-381）、sp-b（1-279）、sp-b^M（201-279）构建到真核载体pEGFP-C1上,转染至A549细胞后采用荧光显微镜检测各SP-B蛋白的表达分布。将sp-b截断基因构建到原核载体pGEX-4T-2上转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达,再过亲和层析纯化。[结果]GFP-SP-B（1-381）蛋白均匀分布于A549细胞质,缺失C端非成熟体的GFP-SP-B（1-279）表达分布明显发生改变,缺失N、C端非成熟体的GFP-SP-B^M蛋白分布与GFP-SP-B（1-279）类似;重组表达并纯化了分子量约为39 kDa的可溶性蛋白GST-SP-B（265-381）。[结论]非成熟序列可改变成熟体SP-B^M在A549细胞中的表达和分布; GST-sp-b（265-381）重组质粒可在大肠杆菌BL21中高效表达分子量约为39 kDa的可溶性蛋白。 

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【部分图文】：

前体蛋白SP-B生物信息分析

SP-B片段蛋白在A549细胞中的表达分布

SP-B片段蛋白的原核表达和纯化

【参考文献】：
期刊论文
[1]肺表面活性物质治疗急性呼吸窘迫综合征研究现状[J]. 李科纯,钱素云,曾健生.  中国实用儿科杂志. 2018(06)
[2]SP-B外显子4（T131I）位点与蒙古族新生儿呼吸窘迫综合征相关性研究[J]. 胡亚楠,张亚昱,刘春丽,刘春枝,梅花,王晶,新春.  临床儿科杂志. 2016(11)
[3]线粒体自噬受体Bnip3的载体构建及蛋白表达纯化[J]. 张玲莉,张星亮.  生物技术. 2015(04)

硕士论文
[1]肺表面活性蛋白B前肽proSP-B的重组表达及抗菌活性研究[D]. 刘钦.重庆理工大学 2017
[2]肺表面活性蛋白SP-B定位及模拟肽生物活性初步研究[D]. 王鹏.重庆理工大学 2013



本文编号：3731672