PKM2对新生HIE小鼠神经元凋亡的影响

发布时间：2023-03-24 20:41

　　目的:探讨M2型丙酮酸激酶同工酶(PKM2)对新生缺氧缺血性脑病(HIE)小鼠皮质神经元凋亡的影响。方法:根据改良Rice-Vannucci法建立新生小鼠HIE模型,另设假手术组。建模24 h后麻醉小鼠并分离大脑组织,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死体积,Western blotting、免疫组化和免疫荧光检测皮质组织PKM2、裂解的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)的表达,TUNEL染色检测神经元细胞凋亡。通过糖氧剥夺(OGD)实验和PKM2-siRNA转染来评价PKM2在体外对神经元凋亡的影响。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)方法测定存活细胞数。结果:HIE组小鼠的脑梗死体积比显著高于假手术组(43.26%vs 0.71%)。与假手术组相比,HIE组小鼠大脑皮质组织和神经元中PKM2蛋白的表达水平显著升高。HIE组小鼠大脑皮质神经元的TUNEL阳性率显著高于假手术组(37.68%vs 8.95%);HIE组小鼠大脑皮质中凋亡相关蛋白cleaved ca...

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验1
        1.1.1 小鼠HIE模型建立
        1.1.2 2,3,5- 氯化三苯基四氮唑(TTC)染色
        1.1.3 Western blotting分析
        1.1.4 免疫组化染色
        1.1.5 免疫荧光染色
        1.1.6 TUNEL染色
    1.2 实验2
        1.2.1 小鼠皮质神经元的培养
        1.2.2 糖氧剥夺(OGD)实验
        1.2.3 PKM2- siRNA转染
        1.2.4 3- (4,5- 二甲基噻唑- 2)-2,5- 二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验
    1.3 统计学处理
2 结 果
    2.1 TTC染色分析HIE建模后小鼠的脑梗死体积
    2.2 HIE小鼠大脑皮质组织和神经元中PKM2蛋白的表达
    2.3 HIE小鼠大脑皮质神经元的凋亡情况及凋亡相关蛋白的表达
    2.4 PKM2对小鼠皮质相对活神经元数的影响
    2.5 PKM2对小鼠皮质神经元凋亡的调控作用
3 讨 论



本文编号：3769813