外泌体环状RNA CDR1as调控大鼠肠神经嵴干细胞增殖、凋亡及迁移的实验研究

发布时间：2023-06-03 05:47

　　目的:肠神经系统(Enteric nervous system,ENS)发育异常作为最常见的儿童消化道畸形之一,其调控机制目前尚不清楚。在本课题组前期转录组测序结果中发现小脑变性相关蛋白1反义转录物(cerebellar degeneration-related ptotein 1antisese,CDR1as)存在差异性表达。CDR1 as是CDR1基因外显子反向剪接以3’-5’磷酸键环化形成的环状RNA。关于环状RNA CDR1as的研究多集中于肿瘤、代谢等疾病,尚未见报道关于肠神经系统发育的研究。因此本研究首先用CDR1 as RT-PCR验证测序结果。根据该实验结果,利用大鼠肠神经嵴干细胞,通过细胞增殖(CCK-8法)、细胞凋亡(AV-PI法)、细胞迁移(Transwell)等功能实验,探讨CDR1as在肠神经系统发育中的作用。研究方法:1、先天性巨结肠患者肠管中CDR1as的表达情况采集术中废弃先天性巨结肠痉挛段作为病例组,正常段作为对照组,利用q RT-PCR观察CDR1as的表达情况。2、利用人鼠同源序列分析、PCR、琼脂糖DNA电泳、克隆测序,获得大鼠CDR1as反式剪...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 临床实验对象、实验动物与实验材料
    2.1 临床实验对象的选择
    2.2 实验动物
    2.3 实验材料
3 实验方法
    3.1 环状RNA CDR1as在先天性巨结肠患者病变肠管中的表达
    3.2 大鼠环状RNA CDR1as反式剪接位点引物设计及鉴定
    3.3 大鼠CDR1as ShRNA腺病毒载体构建及鉴定
    3.4 不同天数(E10、E12、E14)大鼠肠神经嵴干细胞CDR1as的表达
    3.5 大鼠肠神经嵴干细胞CDR1as ShRNA腺病毒载体转染、外泌体提取及鉴定
    3.6 测定大鼠肠神经嵴干细胞CDR1as下调后增殖、凋亡及迁移
    3.7 测定大鼠肠神经嵴(CDR1as敲减)干细胞来源外泌体对其自身增殖、凋亡、迁移
4 实验结果
    4.1 环状RNA CDR1as在先天性巨结肠患者病变肠管中的表达
    4.2 大鼠环状RNA CDR1as反式剪接位点序列及CDR1as ShRNA腺病毒载体鉴定结果
    4.3 不同天数(E10、E12、E14)大鼠肠神经嵴干细胞CDR1as的表达.
    4.4 大鼠肠神经嵴干细胞CDR1as ShRNA腺病毒载体转染结果及外泌体鉴定结果
    4.5 CDR1as下调对大鼠肠神经嵴干细胞细胞增殖、凋亡、迁移实验结果
    4.6 大鼠肠神经嵴(CDR1as敲减)干细胞来源外泌体对正常神经嵴干细胞增殖、凋亡、迁移实验结果
5 讨论
6 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3828760