p115RhoGEF/RhoA信号通路参与调控LPS及TNF-α致脑微血管内皮细胞通透性增高的机制研究

发布时间：2023-10-15 18:19

　　感染性脑损伤是儿科常见的危急重症,虽然随着高效抗生素的广泛应用,近年死亡率有所下降,但其致残率仍然很高,存活的患儿中约有30%-50%留有严重的神经系统后遗症。感染性脑损伤时血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)通透性增高所致的颅高压是其患者致死或致残的主要原因之一。脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)及BMECs(?)司的紧密连接(tight junction,TJ)是维持BBB结构和功能完整的主要成分及结构基础。已有的研究发现多种因素参与了感染性脑损伤时BBB通透性增高的发生发展,涉及细菌毒素如脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、细胞因子如肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-α, TNF-α)与BMECs的相互作用。目前对TJ的研究主要以肺微血管内皮细胞或上皮细胞为对象,感染性脑损伤时LPS致BMECs通透性增高、BMECs-TJ改变及其调控机制的研究较少。 小分子G蛋白Rho (Ras homologous, Rho)属于Ras超家族,包括...

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
縮略词简表
第一部分 LPS对原代大鼠BMECs通透性的影响及机制
    1.1 前言
    1.2 材料和方法
        1.2.1 动物
        1.2.2 主要仪器
        1.2.3 主要试剂
        1.2.4 试剂配置
        1.2.5 实验方法与步骤
        1.2.6 统计学处理
    1.3 结果
        1.3.1 大鼠BMECs形态学观察及Ⅷ因子鉴定
        1.3.2 LPS引起BMECs通透性增高
        1.3.3 LPS上调p115RhoGEF蛋白表达水平
        1.3.4 LPS引起RhoA活性增高
        1.3.5 LPS下调TJ蛋白ZO-1、Occludin和claudin-5的表达水平
    1.4 讨论
    1.5 结论
第二部分 p115RhoGEF/RhoA信号通路参与LPS致BMECs通透性增高的调控
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 研究对象
        2.2.2 主要实验仪器
        2.2.3 主要试剂
        2.2.4 实验方法与步骤
        2.2.5 统计学处理
    2.3 结果
        2.3.1 LPS上调bEnd.3细胞p115RhoGEF蛋白表达
        2.3.2 转染p115RhoGEF-siRNA对bEnd.3细胞p115RhoGEF蛋白表达的影响
        2.3.3 抑制p115RhoGEF表达对LPS诱导bEnd.3细胞RhoA活化的影响
        2.3.4 抑制p115RhoGEF表达对LPS致bEnd.3细胞TEER下降的影响
        2.3.5 抑制p115RhoGEF表达对LPS致bEnd.3细胞F-actin改变的影响
        2.3.6 抑制p115RhoGEF表达对LPS致bEnd.3细胞TJ蛋白表达下降的影响
    2.4 讨论
    2.5 结论
第三部分 Rho信号通路与TNF-α致BMECs通透性增高相关
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 研究对象
        3.2.2 主要实验仪器及设备
        3.2.3 主要试剂及耗材
        3.2.4 实验方法与步骤
        3.2.5 统计学处理
    3.3 结果
        3.3.1 各组RhoA蛋白表达水平
        3.3.2 各组RhoA活性水平
        3.3.3 p115RhoGEF-siRNA对bEnd.3细胞p115RhoGEF表达的影响
        3.3.4 抑制p115RhoGEF表达对TNF-α致RhoA活性改变的影响
        3.3.5 Y-27632预处理对TNF-α致bEnd.3细胞TEER改变的影响
    3.4 讨论
    3.5 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
已发表的论文及获奖成果



本文编号：3854420