Pin1介导高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡中SIRT1核—浆穿梭改变

发布时间：2017-05-26 09:00

  本文关键词：Pin1介导高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡中SIRT1核—浆穿梭改变，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:Pin1是人类肽基脯氨酰异构酶,实验组前期发现,Pin1参与细胞氧化应激通路,抑制其表达后可能够减少高氧所造成的肺损伤,而SIRT1称为沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1,主要定位于细胞核中,其发挥活性参与调节细胞氧化应激过程。本实验建立在稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin1)表达的A549细胞系基础上,当暴露于高氧环境下,SIRT1能否发生核-浆穿梭反应,导致SIRT1活性降低,抗氧化应激能力下降,增加高氧肺损伤可能,而在抑制了Pin1表达的A549细胞中能否减轻SIRT1核-浆穿梭反应,从而减轻高氧肺损伤。方法:通过本实验组前期实验获得稳定抑制Pin1表达的A549-Pin1sh RNA细胞系。随后将实验分为三组:对照组、高氧组,A549-Pin1sh RNA组。对照组是通过含有10%胎牛血清和1%青链霉素的1640培养基中常规培养。高氧组及A549-Pin1sh RNA组均通过通入3L/min的95%氧气和5%二氧化碳高纯混合气10min,并在培养箱中密培养24h的高体积分数氧(高氧)诱导细胞。培养结束后收集细胞进行以下检测:倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态学改变;采用SP细胞免疫化学方法检测各组细胞中Caspase 3、p53蛋白的表达;荧光显微镜检测定位SIRT1核-浆穿梭情况。结果:(1)在倒置显微镜下,对照组细胞生长状态良好,细胞活性好,活细胞数量多,少见细胞漂浮于培养基中,细胞呈梭形,细胞间隙较小,连接紧密。高氧组细胞生长状态差,活细胞明显较对照组明显减少,培养基中可见大量细胞漂浮,剩下的活细胞排列松散,细胞间隙较前明显增宽。而A549-Pin1sh RNA组生长状态欠佳,活细胞数量较高氧组多,悬浮在培养基中的细胞较高氧组少,但未达到对照组水平;(2)SP细胞免疫化学方法检测各组细胞中Caspase 3、p53蛋白的表达:高氧组与对照组相比,Caspase3、p53蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05);而A549-Pin1sh RNA组中Caspase 3、p53蛋白表达较前有所降低,其值介于高氧组与对照组之间,与高氧组、对照组相比差异有统计学意义(P0.05);(3)荧光显微镜检测定位SIRT1核-浆穿梭情况:细胞核染成蓝色荧光,SIRT1染色成红色荧光,其在细胞质及细胞核内均有表达,而主要是在细胞核中发挥其作用。对照组细胞质中红色荧光表达微弱,而高氧组中细胞质红色荧光表达最强,在A549-Pin1sh RNA组红色荧光含量较对照组有所增多,差异有显著性(P0.05),但未达到高氧组水平(P0.05)。结论:高氧能够诱导细胞内Pin1介导p66shc在线粒体的转位增多,使得线粒体内活性氧产生增多,而在抑制Pin1表达的A549-Pin1sh RNA细胞系中,能够减少SIRT1的核-浆穿梭,减少SIRT1活性的下降,从而减少Caspase 3、p53的生成,减轻高氧肺损伤,这有望成为高氧肺损伤新的治疗途径。
【关键词】：Pin1 SIRT1 高氧 核-浆穿梭
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料与方法11-20
• 结果20-25
• 讨论25-29
• 结论29-30
• 参考文献30-36
• 英汉缩写及中英文对照36-37
• 致谢37-38
• SIRT1 在炎症反应和细胞衰老的研究进展 ( 综述 )38-61
• 参考文献44-61
• 攻读硕士学位期间发表和撰写的文章61-62

【参考文献】

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1 车忠丽;董文斌;李清平;雷小平;康兰;郭琳;翟雪松;王胜会;陈枫;;PKCβ/P66Shc氧化应激通路在高氧诱导人肺泡上皮细胞活性氧簇产生中的作用[J];中国当代儿科杂志;2015年03期

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本文编号：396283