rhEPO对宫内炎症致新生大鼠脑白质损伤脑组织NMDA R1mRNA及EPOR表达水平的影响

发布时间：2017-06-29 12:01

  本文关键词：rhEPO对宫内炎症致新生大鼠脑白质损伤脑组织NMDA R1mRNA及EPOR表达水平的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨重组人促红细胞生成素(recGinbinant human erythropoietin,rhEPO)对宫内感染导致的新生鼠脑白质损伤(white matter damage,WMD)的保护作用及有效治疗疗程。方法选取12只孕15天的Wistar大鼠,将大鼠按3:1比例随机分成LPS组(n=9)和对照组(n=3),妊娠第15天LPS组行腹腔注射脂多糖(LPS 0.3mg/Kg)建立宫内感染模型,对照组注射等量的无菌生理盐水(约0.2ml)。分娩胎鼠后,两组分别随机取胎盘(n=6)和胎鼠脑组织(n=10)予苏木素-伊红(Hematoxylin Eosin,HE)染色观察胎盘及脑组织病理改变,同时随机选取LPS组新生鼠64只,对其重新分组为:RhEPO治疗组(n=32)于生后每日腹腔注射rhEPO 5000IU/kg,感染对照组(n=32)于生后每日腹腔注射等量无菌生理盐水0.2ml。并随机选取对照组中新生鼠32只为空白对照组,于生后每日腹腔注射等量无菌生理盐水0.2ml,三组在生后第0小时、3天、7天、14天四个时间点各随机选取8只断头取脑。利用ELISA方法检测脑组织中EPOR蛋白水平及RT-PCR检测脑组织中NMDA R1mRNA表达水平。结果1.14只孕鼠注射LPS后死亡2只,死亡率为18.2%;其中LPS组孕鼠均于孕19.0-20.5天分娩,早产分娩率100%;对照组孕鼠均于孕22.0-22.5天生产仔鼠。2.脂多糖组孕鼠胎盘典型病理变化见明显的炎性侵润。脂多糖组新生鼠脑白质染色淡、结构疏松;神经纤维粗细不均,走向紊乱,出现核固缩表现为细胞核小、突起减少未成熟的神经元;胶质细胞数量增多。3.ELISA方法检测脑组织中EPOR蛋白水平显示:感染对照组在生后3日龄、7日龄可出现EPOR蛋白水平较生理水平升高持续至生后14日龄,较空白对照组差异均有统计学意义(P0.05),rhEPO治疗组在生后第3日龄EPOR蛋白水平较感染对照组显著升高,且高水平表达保持在生后14日龄,较感染对照组差异有统计学意义(P0.05)。4.RT-PCR方法检测脑组织NMDA R1mRNA表达水平显示:感染对照组NMDA R1mRNA表达在生后即刻上升,在第7日龄达到高峰,逐渐下降并持续表达至生后14日龄,较空白对照组差异有统计学意义(P0.05),rhEPO治疗组在生后0小时、3日龄、7日龄新生鼠脑组织NMDA R1mRNA表达水平较感染对照组明显降低,差异具有显著性(P〈0.05)。结论1.孕鼠腹腔内注射LPS可成功模拟宫内感染模型,并导致新生鼠出现脑白质损伤。2.宫内炎症致脑白质损伤新生大鼠脑组织的NMDA过度活化,给予rhEPO治疗可抑制NMDA过度活化介导的氨基酸兴奋性毒性作用,促使EPOR表达上调,以减少宫内炎症致脑组织损伤,发挥神经保护作用。3.rhEPO治疗宫内感染致脑损伤应早期治疗,且14天的疗程目前为最佳疗程。
【关键词】：新生鼠 宫内感染 脑白质损伤 促红细胞生成素 促红细胞生成素受体 N-甲基-D-天门冬氨酸
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 材料和方法10-18
• 1.1 材料10-11
• 1.1.1 实验动物10
• 1.1.2 实验药品和试剂10-11
• 1.1.3 主要实验仪器及设备11
• 1.2 方法11-18
• 1.2.1 宫内感染致脑白质损伤（WMD）新生大鼠模型制作12
• 1.2.2 实验动物分组及干预处理12-13
• 1.2.3 标本采集13
• 1.2.4 脑组织RNA的提取13-14
• 1.2.5 逆转录合成互补DNA(cDNA)14-15
• 1.2.6 建立RT-PCR反应体系15-16
• 1.2.7 ELISA方法检测EPOR表达水平16-18
• 第二章 数据采集与处理18-19
• 2.1 懫用 2~(-△△ct)对 Real-time PCR 结果进行数据分析,计算公式参照公式18
• 2.2 统计学方法18-19
• 第三章 结果19-23
• 3.1 孕鼠分娩及新生鼠存活情况19
• 3.2 胎盘和脑组织HE染色结果19
• 3.3 EPO对宫内感染新生鼠脑组织NMDAR1mRNA表达影响19-20
• 3.4 EPO对宫内感染新生鼠脑组织EPOR蛋白水平表达影响20-23
• 第四章 结论23-24
• 第五章 讨论24-28
• 5.1 宫内感染致新生大鼠脑损伤24
• 5.2 EPO/EPOR在脑白质损伤的表达24-25
• 5.3 NMDA受体在感染新生鼠脑组织中的表达25-26
• 5.4 促红细胞生成素脑部神经系统保护作用26-27
• 5.5 不同疗程应用EPO对感染所致新生鼠脑损伤的保护作用27-28
• 附图表28-30
• 参考文献30-33
• 综述33-38
• 参考文献38
• 参考文献38-42
• 攻读学位期间成果42-43
• 致谢43-44

【共引文献】

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