超极化激活电流对新生大鼠海马缺氧缺血性神经损伤的保护作用研究
发布时间：2017-07-01 01:01
本文关键词：超极化激活电流对新生大鼠海马缺氧缺血性神经损伤的保护作用研究，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的:运用免疫组化和全细胞膜片钳技术观察超极化激活的环核苷酸门控(HCN)通道在海马CA1区的分布,研究缺氧缺血前后Ih的变化以及HCN通道阻断剂对缺氧缺血后神经元的作用,为治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)寻找新靶点提供理论基础。方法:1.免疫组化染色选取新生SD大鼠,对海马HCN通道1-4亚型进行免疫组化染色,激光共聚焦显微镜下观察HCN通道在海马CA1区及椎体神经元上的分布情况。对急性分离的脑片进行To-pro-3染色以标记死亡的神经元数目,观察缺氧缺血(HI)前后及应用HCN通道阻断剂Cs Cl前后海马CA1区椎体神经元死亡数目的变化情况。2.电生理记录利用全细胞膜片钳技术,记录新生SD大鼠急性分离脑片海马CA1区椎体神经元的Ih,并观察HI前后Ih及其激活动力学、自发放电等电生理特性的变化。结果:1.免疫组化染色结果显示HCN1-4通道在海马CA1区均存在荧光染色。2.海马CA1区椎体神经元可记录到呈电压依赖相关的超极化快速激活、缓慢去活的内向电流Ih。3.HI使椎体神经元Ih振幅增大,自发放电的频率减少,而HCN通道阻断剂使自发放电频率增加。4.海马椎体神经元随着HI时间的延长逐渐死亡,HCN通道阻断剂显著增加了死亡神经元的数量。结论:新生大鼠海马CA1区表达HCN通道,HI增大椎体神经元的Ih,减少自发放电的频率,而HCN通道阻断剂增加自发放电的频率并显著增加死亡神经元的数量,表明HI后Ih的增大对神经元具有保护作用。
【关键词】：新生大鼠 缺氧缺血 超极化激活电流 海马CA1区椎体神经元
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R722.1
【目录】：
- 摘要3-5
- ABSTRACT5-9
- 中英文缩略词表9-10
- 第1章 引言10-13
- 1.1 新生儿缺氧缺血性脑损伤及其机制10-11
- 1.2 海马11
- 1.3 HCN通道11-13
- 第2章 材料与方法13-24
- 2.1 实验动物13
- 2.2 主要实验设备及仪器13-14
- 2.3 主要实验试剂14-16
- 2.4 实验溶液配制16-17
- 2.4.1 蔗糖解剖液16
- 2.4.2 人工脑脊液16
- 2.4.3 氧-糖剥夺液16-17
- 2.4.4 电极内液17
- 2.4.5 其它溶液17
- 2.5 实验分组17-18
- 2.6 电生理记录18-21
- 2.6.1 脑片制备18-19
- 2.6.2 电极制备19
- 2.6.3 记录前准备19
- 2.6.4 目标神经元全细胞膜片钳记录19-20
- 2.6.5 海马CA1区椎体神经元体外缺氧缺血模型的制作20
- 2.6.6 全细胞膜片钳记录20-21
- 2.6.7 Ih激活动力学特性的记录21
- 2.6.8 Ih反转电位的测定21
- 2.6.9 电流钳记录自发放电21
- 2.7 免疫组化染色21-23
- 2.7.1 海马HCN通道的免疫组化染色21-22
- 2.7.2 海马神经元To-pro-3 染色22-23
- 2.8 统计学分析23-24
- 第3章 结果24-37
- 3.1 HCN通道在海马CA1区的分布24-25
- 3.2 椎体神经元的Ih记录25-28
- 3.3 椎体神经元受到缺氧缺血性损伤后的电生理变化28-35
- 3.3.1 缺氧缺血后Ih的变化28-31
- 3.3.2 缺氧缺血损伤对Ih的激活曲线和反转电位没有影响31-33
- 3.3.3 缺氧缺血时椎体神经元自发放电减少33-35
- 3.4 缺氧缺血后海马CA1区椎体神经元的死亡情况35-37
- 第4章 讨论37-41
- 4.1 HIE的治疗现状及研究意义37-38
- 4.2 大鼠海马CA1区椎体神经元的Ih38
- 4.3 Ih在椎体神经元缺氧缺血时的保护作用38-40
- 4.4 小结40-41
- 第5章 结论与展望41-42
- 5.1 结论41
- 5.2 展望41-42
- 致谢42-43
- 参考文献43-47
- 攻读学位期间的研究成果47-48
- 综述48-54
- 参考文献52-54
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本文编号：504025
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