长链非编码RNAs在低出生体重大鼠肾单位发育障碍中的作用探讨

发布时间：2017-07-08 17:04

  本文关键词：长链非编码RNAs在低出生体重大鼠肾单位发育障碍中的作用探讨

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【摘要】：背景与目的:近年来,长链非编码RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)调节多种重大疾病发生、发展的机制研究已经逐渐成为各个领域的研究热点。lncRNAs在器官发育和疾病进程中发挥着重要的基因调控功能,但是lncRNAs在肾脏发育过程中作用的研究罕有报道。本研究通过lncRNA生物芯片技术筛选低出生体重和正常对照大鼠肾脏组织差异表达的lncRNAs,探讨lncRNAs在低出生体重大鼠肾单位发育过程中的表达规律,分析lncRNAs在低出生体重大鼠肾单位发育障碍中的作用。方法:选择育龄期健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠孕期常规饲料(22%蛋白)喂养,建立正常出生体重(Control)组对照大鼠模型,孕期全程低蛋白饲料(6%蛋白)喂养,建立低出生体重(low birth weight,LBW)大鼠模型。选取雄性新生大鼠作为研究对象。随机选择两组10日龄雄鼠各3只,通过lncRNA生物芯片技术筛选出两组大鼠肾脏差异表达的lncRNAs;进一步选出其中差异高表达的lncRNAs 3个和差异低表达的13个经qReal-time PCR技术在1天、10天雄鼠肾脏进行验证,同时观察其在肝、肺、脑组织中的表达;Western Blot检测肾脏组织MAPK10(丝裂原激活蛋白激酶10)、ERK1/2(细胞外信号调节蛋白激酶1/2)、p38MAPK(p38丝裂原活化蛋白激酶)、磷酸化p38MAPK(磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶)蛋白的表达量;利用酸消化法观察两组大鼠生后10天肾单位数目的变化;TUNEL法检测两组大鼠生后1天、10天肾脏组织中的肾小球细胞凋亡情况。结果:(1)LBW组大鼠生后1天、10天体重和肾重均明显低于Control组(P0.05)。(2)LBW组大鼠生后10天肾单位数目较Control组明显减少(P=0.001),肾单位数目与出生体重呈正相关(r=0.718,P=0.009)。(3)LBW组大鼠生后1天、10天肾小球凋亡细胞较control组明显增多。(4)基因芯片筛选出差异表达的lncrnas42个(高表达17个,低表达25个)、mrnas129个(高表达41个,低表达88个)。(5)差异表达的lncrnas和mrnas相关性分析显示,6个差异表达的lncrnas与mapk10mrna表达密切相关,其中tcons_00031111表达与mapk10mrna表达呈正相关(r=0.951,p=0.004)。(6)qreal-timepcr验证差异表达的16个lncrnas,有11个lncrnas的表达结果与芯片实验结果基本一致;且大部分经验证的lncrnas在肾单位发育期随着大鼠日龄的增加其表达逐渐上调。(7)经验证的16个lncrnas在各脏器中均有表达,在肾脏组织中显著高表达的lncrnas3个(tcons_00031111、tcons_00134056和tcons_00014139)。在肾脏组织高表达、两组间比较有统计学差异且与芯片结果一致的lncrna仅有tcons_00031111(p0.05)。(8)肾脏组织中tcons_00031111的表达与肾单位数目呈正相关(r=0.888,p0.001)。(9)生后1天、10天,lbw组大鼠肾脏组织erk1/2蛋白表达无明显变化(p0.05);lbw组大鼠生后1天肾脏组织mapk10蛋白表达无明显变化,生后10天肾脏组织mapk10蛋白表达有所上调,但差异无统计学意义(p0.05);生后1天、10天,lbw组大鼠肾脏组织磷酸化p38mapk蛋白表达量较control组均显著上调(p=0.004,p=0.025)。(10)生后10天大鼠肾脏中磷酸化p38mapk蛋白表达与tcons_00031111的表达呈负相关(r=-0.851,p0.001)。结论:(1)lbw组大鼠肾脏组织中存在lncrnas和mrnas差异表达谱,经验证的大部分lncrnas在肾单位发育期随着大鼠日龄的增加其表达逐渐上调。(2)lncrnatcons_00031111在正常肾脏组织中高表达,在lbw大鼠肾脏显著下调,且其在肾脏组织中的表达与肾单位数目呈显著正相关,提示lncrnatcons_00031111可能与lbw大鼠肾单位发育障碍有关。(3)lncrnatcons_00031111的表达与肾脏组织中磷酸化p38mapk的蛋白表达呈显著负相关,提示lncrnatcons_00031111可能通过p38mapk信号通路在肾单位发育障碍中发挥作用。(4)lncrnas可能是lbw大鼠肾单位发育障碍新的分子机制之一,而lncrnatcons_00031111可作为肾单位发育程度的参考指标和发育障碍的研究靶点。
【关键词】：长链非编码RNAs 低出生体重 肾单位发育障碍 丝裂原活化蛋白激酶
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R726.9
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-24
• 结果24-41
• 讨论41-46
• 结论46-47
• 参考文献47-51
• 综述51-59
• 参考文献55-59
• 英汉双解缩略词59-60
• 攻读学位期间公开发表的论文60-61
• 本课题资助基金项目61-62
• 攻读学位期间所获奖项62-63
• 致谢63-64

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本文编号：535450