MBL基因多态性及其血浆浓度与新生儿感染的关系

发布时间：2017-07-14 17:21

  本文关键词：MBL基因多态性及其血浆浓度与新生儿感染的关系

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【摘要】：感染是导致新生儿，尤其是早产儿和低出生体重儿发病和死亡的一个重要的、常见的原因，其严重影响儿童的生长发育和智力发育，给社会和家庭带来巨大的经济负担。已有的文献报道，新生儿感染易发生于先天性免疫功能低下的患儿，与遗传、先天性免疫系统发育异常等因素有关。近年来的研究表明，甘露糖结合凝集素（mannose-binding lectin，MBL）缺陷作为最常见的免疫缺陷状态，是我国新生儿感染的重要原因。MBL是先天性免疫系统的重要分子，它可以与病原微生物表面的糖链结合，通过胶原样区激活MBL相关丝氨酸蛋白酶，进而激活补体系统，对适应性免疫系统尚未发育成熟的新生儿尤其是早产儿，甘露糖结合凝集素在防御抵抗多种病原微生物感染的天然免疫中起着重要的作用，是婴幼儿非特异性免疫系统中的一线抗感染分子。血浆MBL浓度主要受其基因多态性影响：基因编码区的突变可以破坏MBL胶原样区结构，导致MBL多肽链不能寡聚化，而易被降解成无功能蛋白。启动子区的单核苷酸多态性（singlenucleotide polymorphisms，SNPs）则从转录水平影响MBL的浓度。目前研究主要集中在MBL基因启动子区的-550，-221和5'UTR+4位点和外显子1区+223、+230和+239位点的基因多态性上。 本研究通过PCR（Polyrnerase Chain Reaction，PCR）和直接测序的方法，分析福建地区新生儿MBL基因已知六个位点的多态性，并试图发现新的基因多态性位点，进一步探讨MBL基因多态性-血浆MBL浓度-新生儿感染三者之间的关系。 研究目的： 1.研究福建地区汉族新生儿MBL启动子区和外显子1已知6个位点的基因型及由此所构成的单体型。 2.分析MBL基因型及其单体型在早产儿和足月儿间的差异，探讨MBL基因多态性与早产的相关性。 3.探讨MBL基因型及其单体型与血浆MBL浓度的相关性。 4.分析MBL基因多态性、血浆MBL浓度与新生儿感染包括肺炎、败血症之间的相关性。 5.发现本地区汉族新生儿MBL基因新的多态性位点。 研究方法： 1.收集福建省妇幼保健院新生儿救护中心2013年1-6月期间的182例患儿，其中对照组87例，感染组95例，分为新生儿肺炎组和新生儿败血症组，其诊断主要依据患儿的临床症状、实验室数据和影像学资料。 2.针对拟研究的6个位点的序列，自行设计引物。提取全血DNA后进行PCR扩增，产物经纯化后直接测序分析。 3.用ELISA法检测不同基因型的血浆MBL浓度。 4.收集患儿的病例资料以及相关的实验室数据，并用SPSS软件分析MBL基因型及单体型与新生儿感染的关系。 研究结果： 1.182例汉族新生儿中启动子区-550位点G/G、G/C和C/C基因型频率分别为0.236、0.489和0.275，G和C型等位基因频率分别为0.481和0.519。-221位点C/C、C/G和G/G基因型频率为0.055、0.308和0.637，C和G等位基因频率分别为0.209和0.791。5’UTR+4位点C/C、C/T和T/T基因型频率为0.764、0.214和0.022，C和T等位基因频率为0.87和0.13。经χ2检验，启动子区3个位点的等位基因频率符合Hardy-weinberg平衡。+230位点G/G、G/A和A/A基因型频率为0.731、0.247和0.022，G和A等位基因频率分别为0.854和0.146。经χ2检验，该位点的等位基因频率也符合Hardy-weinberg平衡。 2.经SHEsis软件分析，-550、-221位点和+230位点间均存在较高度的连锁不平衡。本研究中包括启动子和外显子1区的单体型共有6种：HYPA、LYPB、LYPA、LXPB、LXPA和LYQA，其中HYPA最常见，频率为0.463，其他单体型频率分别为0.137、0.062、0.009、0.2和0.111。 3.早产组和足月儿组启动子区域的三个关键位点中，-550位点变异型等位基因频率在足月儿组和早产儿组无显著性差异（χ2值为2.04，P0.05）。-221位点在早产儿组C和G等位基因频率分别为0.268和0.732，而足月儿组C和G等位基因频率分别为0.160和0.840，两者间具有显著性差异(χ2值为5.9, P 0.05)。+4位点的C和T型等位基因频率在早产儿组和足月儿组间无显著性差异(χ2值0.467,P0.05)。外显子1区三个关键位点中只有+230位点多态性改变，其中G和A等位基因频率在早产儿和足月儿组中无显著性差异(χ2值为0.739，P0.05)。共检出5种单体型LXPA、LYPB、LYPA、LYQA和HYPA，其中早产儿组LXPA明显高于足月儿组，OR值1.794(95%CI1.06～3.017，P 0.05)，而LYPB在足月儿组明显高于早产儿组，其OR值0.533(95%CI0.28～0.99，P 0.05)，其它三种单体型在两组之间差别无显著性差异。 4.除了6个已知位点的多态性改变外，还发现启动子区-327到-332位点间AGAGAA共6个碱基丢失，且有4例出现纯合性丢失。同时在该位点的上下游同时出现了-435G/A、-427A/C、-349A/G、-336A/G和-70C/T的多态性改变。经连锁不平衡检验发现c.4665-4670delAGAGAA、-435G/A、-427A/C、-349A/G、-336A/G和-70C/T各多态位点间具有强连锁性。 5．MBL基因启动子区-550和+4位点变异型等位基因频率在感染组和对照组之间无显著性差别，感染组-221位点变异型等位基因频率高于正常对照组(0.722vs0.644，χ2=7.14，P0.05)，+230位点感染组的A型等位基因频率为0.141，而对照组中则为0.061，感染组显著高于对照组(χ2=6.4，P 0.05)。比较不同组别MBL单体型频率发现，感染组LYPB和LYQA的频率高于对照组(0.129vs0.021、0.152vs0.001, χ2=14.74、27.9, P 0.005)，而LYPA的频率低于对照组(0.072vs0.238,χ2=20.2, P 0.05)，其它单体基因型频率在疾病组与对照组间相比无显著性差异。 6.对照组的MBL浓度中位数1560ng/ml，感染组MBL浓度中位数452ng/ml，对照组血浆MBL浓度明显高于感染组，差别有显著性意义(z=-4.566，P=0.000)。同时将感染组分成新生儿肺炎组和败血症组，将对照组和各疾病组MBL浓度进行比较，其中位数值分别为1560ng/ml、445ng/ml和770ng/ml，差别有显著性意义(Z值分别为-4.33和-2.85，P 0.05)。而各疾病组间浓度差异无显著性。 7.基因型与MBL浓度的关系：外显子是影响血浆MBL表达的最关键因素，产物表达A/AA/BB/B，其血浆MBL浓度中位数分别为2409ng/ml、1069ng/ml和33.3ng/ml，有显著性差异（P0.001）。在外显子相同的情况下，HYP/HYP型患者的MBL浓度（3400ng/ml）最高，而LYP/LYQ型浓度（310ng/ml）最低。 研究结论： 1.我省汉族MBL基因-550、-221、+4和+230位点呈现不同程度的多态性改变；+223和+239位点均未发现多态性改变。 2.我省汉族新生儿单体型有HYPA、LYPB、LYPA、LXPB、LXPA和LYQA，其中以HYPA最多见；新发现LYQA单体基因型。 3.单体型在早产儿和足月儿组中分布频率不同，LXPA是早产的危险因子，而LYPB是保护因子。 4.检出C.4665-4670delAGAGAA多态性改变，这些病例中同时出现-435G/A、-427A/C、-349A/G、-336A/G和-70C/T等位点的多态性改变，各位点间具有强连锁性。 5. MBL基因多态性改变与新生儿感染相关，单体型LYPB和LYQA感染组明显高于正常组，，而LYPA则相反。 6.低血浆MBL浓度是引起新生儿感染的危险因素之一；对照组和感染组间MBL浓度显著性差异，而感染组间MBL水平无显著性差异。 7.基因型与MBL浓度的关系：外显子是影响血浆MBL表达的最关键因素，产物表达A/AA/BB/B。在外显子相同的情况下，HYP/HYP型，MBL浓度最高，而LYP/LYQ型浓度最低。
【关键词】：甘露糖结合凝集素 基因多态性 感染
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.13
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-19
• 第一部分 福建地区汉族新生儿 MBL 基因多态性和单体型19-42
• 材料与方法19-38
• 一、材料19-22
• 二、方法22-38
• 1 标本的采集和处理22
• 2 基因组 DNA 的抽提22-23
• 3. 基因组 DNA 浓度测定23
• 4. 本地区汉族新生儿 MBL 基因多态性检测23-25
• 5. 结果25-35
• 6. 启动子区域其他的多态性位点35-38
• 讨论38-41
• 小结41-42
• 第二部分 MBL 基因多态性及血浆 MBL 水平与新生儿感染的关系42-57
• 材料与方法42-53
• 一、材料42-43
• 二、方法43-53
• 1. 组间基因多态性比较43
• 2. ELISA 法检测血浆 MBL 浓度43-44
• 3 统计方法44
• 4 结果44-53
• 讨论53-56
• 小结56-57
• 结论57
• 参考文献57-63
• 致谢63-64
• 综述64-70
• 参考文献68-70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨军,李成荣,李永柏,黄惠君,王国兵;甘露糖结合凝集素基因多态性与中国汉族儿童过敏性紫癜的相关性研究[J];中国当代儿科杂志;2003年06期

本文编号：541987