儿茶酚胺通过调控β2-AR-SIRT1-p53信号通路诱导宫颈癌细胞化疗药物抵抗

发布时间：2017-07-30 07:01

  本文关键词：儿茶酚胺通过调控β2-AR-SIRT1-p53信号通路诱导宫颈癌细胞化疗药物抵抗

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【摘要】：背景:宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，它的发病率在女性恶性肿瘤中仅次于乳腺癌居于第二位。目前，我国每年新确诊的宫颈癌病例及其死亡率呈逐年上升趋势，而且发病年龄日趋年轻化，宫颈癌已成为危害我国女性健康的一种重要疾病。手术治疗和化疗仍是目前宫颈癌的重要治疗手段。宫颈癌细胞对化疗药物的抵抗是阻碍化疗药物临床治疗有效性以及造成患者不良预后的重要原因，但是宫颈癌对化疗药物耐药的机制尚完全不清楚。 包括阿霉素在内的部分临床常用化疗药物可以通过诱导抑癌基因P53的表达以及活化，激活P53下游靶基因的表达，从而诱导抑制肿瘤细胞增殖或诱导肿瘤细胞凋亡。磷酸化、泛素化等多种翻译后修饰对于p53发挥其生物学活性至关重要。乙酰化修饰可增强p53的稳定性并促进p53的转录活性。P53的乙酰化修饰是一种可逆性反应。去乙酰化酶SIRT1可以使P53去乙酰化，抑制P53介导的转录活性，抑制下游靶基因的表达，从而促进肿瘤发生，发展。 肿瘤患者普遍存在不同程度的心理压力，这会诱导机体产生慢性应激反应。大量事实表明，慢性应激反应可显著影响肿瘤的进程及患者的预后。本实验室在前期工作中发现应激反应相关激素-糖皮质激素可通过增强宫颈癌细胞中HPV（人乳头瘤状病毒）基因编码的E6蛋白的表达，后者抑制p53以及miR145的表达，从而抑制化疗药物对宫颈癌细胞的杀伤。这一结果提示应激反应相关激素可能在慢性应激反应调控肿瘤恶性演进的过程中发挥重要作用。 儿茶酚胺（肾上腺素和去甲肾上腺素）是另一类重要的应激反应相关激素，机体在经历慢性心理应激反应的过程中，体内儿茶酚胺的水平显著升高。我们实验室的前期工作已证明，儿茶酚胺在肿瘤细胞的生物学行为调控中具有重要作用。然而儿茶酚胺能否影响宫颈癌对化疗药物的敏感性以及相关的分子机制均不清楚。 目的:探索儿茶酚胺调控宫颈癌细胞对化疗药物的敏感性，，以及此过程的精确分子机制。 方法:（1）Western-Blot分析儿茶酚胺刺激宫颈癌细胞对SIRT1的表达影响；（2）实时定量RT-PCR检测儿茶酚胺刺激宫颈癌细胞刺激后SIRT1转录水平的影响；（3）Western-Blot和免疫荧光法检测儿茶酚对化疗药物诱导P53乙酰化的影响；（4）双荧光素酶法检测儿茶酚胺对阿霉素诱导的P53转录活性增强的影响；（5）TUNEL染色和Annexin V-FITC染色测定儿茶酚胺是否影响阿霉素诱导的细胞凋亡；（6）通过细胞增殖实验检测儿茶酚胺能否诱导宫颈癌细胞的化疗药物抵抗（7）Western-Blot和双荧光素酶实验检测SIRT1在儿茶酚胺抑制阿霉素诱导的P53乙酰化水平以及P53转录活性中的作用；（9）通过动物模型评价儿茶酚胺在体内能否拮抗化疗药物阿霉素的抑瘤效应（10）免疫组化检测β2-AR在宫颈癌临床组织标本中表达模式。 结果:（1）Western-Blot分析结果显示儿茶酚胺刺激宫颈癌细胞可以上调SIRT1的表达，并具有时间和剂量依赖性。（2）儿茶酚胺刺激后可以在转录水平，显著上调SIRT1的表达。（3）儿茶酚胺可抑制化疗药物诱导的P53乙酰化增强。（4）儿茶酚胺能够显著抑制阿霉素诱导的P53转录活性。（5）儿茶酚胺能够抑制阿霉素诱导的细胞凋亡。（6）儿茶酚胺能够明显拮抗阿霉素对细胞的增殖抑制效应。（7）SIRT1在儿茶酚胺抑制阿霉素诱导的P53乙酰化水平以及P53转录活性中起到了关键作用。（8）儿茶酚胺能够在移植瘤小鼠体内抑制化疗药物阿霉素的疗效。（9）β2-AR在宫颈癌临床组织中高表达。 结论:在本研究中，我们首次发现儿茶酚胺通过诱导β2-AR活化，激活SIRT1表达上调，抑制P53乙酰化和P53的转录活性，拮抗化疗药物阿霉素的抗癌效应。并首次报道，儿茶酚胺能够在动物体内抑制化疗药物阿霉素对宫颈癌的治疗效果。此外，本研究亦首次发现β2-AR在宫颈癌临床组织中高表达。本研究的进一步深入可能为临床提高化疗药物疗效提供理论依据。
【关键词】：β2-AR SIRT1 P53 阿霉素 宫颈癌
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 缩略词表10-11
• 引言11-13
• 1 材料13-15
• 1.1 细胞系13
• 1.2 实验动物13
• 1.3 实验试剂13-14
• 1.4 实验仪器14-15
• 2 方法15-23
• 2.1 蛋白免疫印迹分析15
• 2.2 细胞转染15-16
• 2.3 免疫荧光16
• 2.4 P53 启动子转录活性分析16-17
• 2.5 REAL-TIME RT-PCR17-19
• 2.6 流式细胞术19
• 2.7 细胞增殖检测19
• 2.8 TUNEL 细胞凋亡19-20
• 2.9 动物模型建立20-21
• 2.10 免疫组化21-23
• 3 结果23-35
• 3.1 儿茶酚胺刺激宫颈癌细胞可以上调 SIRT1 的表达23-24
• 3.2 儿茶酚胺可以在转录水平上调 SIRT1 的表达24-25
• 3.3 儿茶酚胺主要通过诱导 2-AR 活化上调 SIRT1 表达25
• 3.4 儿茶酚胺通过增强 SIRT1 表达从而抑制阿霉素诱导的 P53 乙酰化25-27
• 3.5 儿茶酚胺能够抑制阿霉素诱导的 P53 转录活性增强27-28
• 3.6 儿茶酚胺能够明显抑制阿霉素诱导的细胞凋亡28-29
• 3.7 儿茶酚胺能够明显诱导化疗药物的抵抗29-31
• 3.8 SIRT1 在儿茶酚胺抑制阿霉素诱导的 P53 乙酰化以及 P53 转录活性中，起到了关键作用31-32
• 3.9 儿茶酚胺能够在体内拮抗化疗药物阿霉素的抑瘤效应32-33
• 3.10 2-AR 在宫颈癌组织中高表达33-35
• 4 结论35-37
• 参考文献37-39
• 文献综述39-47
• 参考文献44-47
• 攻读学位期间发表的学术论文目录47-49
• 致谢49-50

【共引文献】

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本文编号：592930