多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的检测及其与可移动遗传元件的相关性研究

发布时间：2017-11-18 03:17

  本文关键词：多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的检测及其与可移动遗传元件的相关性研究

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【摘要】：目的:1.了解南昌大学第一附属医院2012年~2013年间临床分离多重耐药肺炎克雷伯菌的分布情况及耐药特性,为临床抗菌药物选择提供依据。2.研究2012年~2013年多重耐药肺炎克雷伯菌临床连续分离株中质粒介导喹诺酮类耐药基因的分布和特性。3.研究质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因与移动基因元件携带率的相关性,并分析其与不同抗菌药物耐药性的关系。方法:1.收集南昌大学第一附属医院临床标本中分离的多重耐药肺炎克雷伯菌40株,采用最低抑菌浓度(MIC)法测定抗菌药物对细菌的敏感性,药敏结果按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)2012推荐标准进行判读。2.采用PCR法检测质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(PMQR),包括qnr基因、药物外排泵蛋白qep A和氨基糖苷乙酰转移酶的变异基因aac(6’)-Ib-cr,阳性结果测序,测序结果在Genbank比对。对PMQR基因阳性菌株进行接合转移试验。ERIC-PCR及MLST分析是否克隆传播。3.PCR扩增部分可移动遗传元件遗传元件(插入序列IS26、IS2、ISCR1、ISEcp1,整合子int I1、int I2、int I3)。经琼脂糖凝胶电泳,检出的阳性基因测序并比对;PCR-mapping对移动元件下游是否携带PMQR基因进行检测,研究分析它们之间的相关性。结果:1.本研究共收集2012年~2013年多重耐药肺炎克雷伯菌40株,药敏结果显示耐药率最高的是氨苄西林,耐药率为100%;而头孢唑啉,头孢他啶,头孢曲松,氨曲南,厄他培南,庆大霉素的耐药率为80%~97.5%;亚胺培南的耐药率为77.5%;耐药率最低的是左氧氟沙星,但也达到了55%。ERIC-PCR及MLST结果显示,存在多个克隆株,主要为ST11/A型,但也存在ST340/A型、ST437/A型及ST147/J型等克隆株。2.40株多重耐药肺炎克雷伯菌中,其中有37株(92.5%)检测出含有qnr基因的阳性菌株,qnr A共33株,均为qnr A1型;qnr B共12株,均为qnr B4型;qnr S共16株,均为qnr S1型,并且有4株同时携带三种以上qnr基因,qnr C、qnr D和qep A基因本次实验均未检出,另外检测出含aac(6’)-Ib基因28株,测序比对分析发现12株为aac(6’)-Ib-cr基因;40株PMQR基因阳性菌株中,接合转移试验成功8株,接合子与受体菌相比,对氟喹诺酮类药物的MIC值提高了2~32倍,部分或全部qnr基因转移到接合子上。3.40株肺炎克雷伯菌中,检出ISCR1基因阳性30株,检出ISEcp1基因阳性40株,整合子intl1阳性32株,检出IS2基因阳性16株,检出IS26基因阳性10株;PCR-mappin扩增及序列分析ISCR1连接qnr A1共15株,ISCR1连接qnr B4有共2株,ISCR1连接qnr S1共4株;ISEcp1连接qnr B4共9株,ISEcp1连接qnr A1共4株,ISEcp1连接qnr S1共1株;IS2连接qnr S1共8株。结论:1.临床分离的40株肺炎克雷伯菌株耐药严重,对多种临床常用的抗菌药物耐药率达55%以上,应加强对肺炎克雷伯菌的耐药监测,并规范临床抗菌药物的使用。2.本院肺炎克雷伯菌PMQR基因以qnr基因为主,其次是aac(6’)-Ibr基因,qnr基因以qnr A为主,其次是qnr S和qnr B,亚型包括qnr A1、qnr B4、qnr S1和aac(6’)-Ib-cr,未检出qnr C、qnr D和qep A基因。3.本院分离的多重耐药肺炎克雷伯菌株检测出可移动遗传元件携带率很高,且以多种共存的方式存在,ISCR1下游以连接qnr A1为主,ISECP1下游以连接qnr B4为主,IS2下游以连接qnr S1为主。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.5;R563.1

【参考文献】

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本文编号：1198358