MIF基因启动子多态性与肺结核病遗传易感性关系的研究

发布时间：2017-12-10 16:25

本文关键词：MIF基因启动子多态性与肺结核病遗传易感性关系的研究

【摘要】：研究目的：巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)是一种促炎性细胞因子,主要由巨噬细胞产生,T淋巴细胞、单核细胞、树突状细胞、B淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞也可以表达MIF,在炎性疾病和自身免疫性疾病的发病机理中起着重要作用。体外研究表明,人的MIF可以抑制致病性结核分枝杆菌的生长繁殖。人体感染结核分枝杆菌后,主要由巨噬细胞聚集到感染部位,吞噬结核菌,提呈抗原,引起免疫反应,导致不同程度肺结核病的发生,而MIF又能抑制巨噬细胞的游走。因此,MIF在肺结核病的发生发展中起着不容忽视的作用。本课题通过检测肺结核病人(初治、复治)和健康对照组人群外周血清中MIF蛋白表达含量差异,mRNA转录量差异,并对MIF基因启动子-794区CATT重复序列微卫星多态性和-173区G/C单核苷酸多态性进行分析,从而讨论MIF与肺结核病遗传易感性的关系,为今后研究肺结核病的发病机理和治疗提供理论基础和依据。研究方法： 1、试验分组：健康对照组、初治肺结核病组、复治肺结核病组和肺结核病组。 2、收集所有研究对象外周全血EDTA抗凝血样本及临床资料,凝固后分离血清；提取外周全血中有核细胞的总DNA及总RNA,血清做ELISA检测。 3、采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中MIF蛋白含量,应用SPSS17.0统计软件对其表达量的差异进行统计学分析。 4、设计特异性引物扩增-794区MIF基因启动子片段,扩增产物纯化后通过基因测序技术分析MIF基因-794区CATT5-8微卫星多态性,统计基因型和等位基因的分布频率,对其分布情况进行统计学分析。 5、设计特异性引物扩增-173区MIF基因启动子片段,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测MIF基因-173区G/C单核苷酸多态性,统计基因型和等位基因的分布频率,对其分布情况进行统计学分析。 6、设计特异性引物扩增目的基因(MIF)和内参基因(β-actin),将高品质的RNA反转录为cDNA,运用实时荧光定量PCR (QRT-PCR)法检测mRNA转录量,利用2-△△CT法进行相对定量分析,并对其进行统计学分析。研究结果： 1、肺结核病组血清MIF蛋白表达量高于健康对照组(P0.05)。肺结核病组-794区CATT位点基因型(5/5+5/6+6/6)和(7/X+8/X)血清MIF蛋白表达量均高于健康对照组(P0.05)。肺结核病组-173区G/C位点基因型GG和(GC+CC)血清MIF蛋白表达量均高于健康对照组(P0.05)。 2、MIF基因启动子-794区CATT位点基因型(5/X+6/X vs.7/7+7/8)分布在初治肺结核病组与健康对照组、肺结核病组与健康对照组比较中差异有统计学意义(P0.05)；等位基因(5+6vs.7+8)分布在初治肺结核病组与健康对照组、肺结核病组与健康对照组比较中差异有统计学意义(P0.05)。 3、MIF基因启动子-173区G/C位点基因型(GGvs. GC+CC)分布在初治肺结核病组、复治肺结核病组、肺结核病组与健康对照组比较中差异均有统计学意义(P0.05)；而等位基因(Gvs.C)分布在各试验组与健康对照组比较中差异均无统计学意义(P0.05)。 4. MIF mRNA转录量在各试验组与健康对照组比较中差异有统计学意义(P0.05)；各试验组在对应-794区CATT位点基因型(5/5+5/6+6/6)和(7/X+8/X)与健康对照组比较MIF mRNA含量差异均有统计学意义(P0.05)；各试验组在对应-173区G/C位点基因型GG和(GC+CC)与健康对照组比较MIF mRNA含量差异均有统计学意义(P0.05)。结论： 1、肺结核病组(初治、复治)外周血清中MIF蛋白表达量较健康对照组升高,提示MIF参与肺结核病的发生发展。CATT重复次数越高的组中,MIF蛋白表达量越高。携带基因突变C的组中,MIF蛋白表达量高。 2、MIF基因启动子微卫星多态性位点-794与肺结核病易感性相关。等位基因高重复次数的CATT7、CATT8易患肺结核病,而肺结核病的复发与CATT重复序列次数不相关。 3、MIF基因启动子单核苷酸多态性位点-173与肺结核病易感性相关。携带基因突变C的易患肺结核病,而肺结核病的复发与G/C多态性不相关。 4、肺结核病组(初治、复治)与健康对照组MIF mRNA转录量有差异。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R521

【参考文献】

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