Ac-SDKP通过抑制内质网应激减轻纤维化模型上皮—间质转化的机制研究

发布时间：2018-02-22 18:16

本文关键词： Ac-SDKP 特发性肺间质纤维化(IPF) 内质网应激(ERS) 上皮-间质转化(EMT)　出处：《山西医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过体内实验和体外实验,探讨特发性肺间质纤维化(IPF)病程中,Ac-SDKP通过抑制内质网应激进而干预上皮-间质转化过程而延缓肺纤维化发展的作用机制。方法:体内实验:将24只健康雄性C57BL/6小鼠(体重25±2g)随机分为3组:假手术对照组(N组,n=8只)、肺纤维化模型组(M组,n=8只)、肺纤维化+Ac-SDKP干预治疗组(P组,n=8只)。M组及P组小鼠采用气管内注入博来霉素(5 mg/kg,共配制成50μl混合溶液)法制备小鼠肺纤维化模型,21天后于P组小鼠腹腔内埋入Ac-SDKP药物微量释放泵(内含Ac-SDKP混合溶液:Ac-SDKP 800 ug.kg-1.d-1,冰乙酸0.1 M,卡托普利100 mg.kg-1.d-1,溶液配制剂量经查询大量国内外文献而定),持续干预21天。N组造模方法同M组,气管内注入等体积(50μl)0.9%氯化钠生理盐水。N组和M组小鼠于造模完成后第21天处死,而P组小鼠于Ac-SDKP干预治疗后第21天处死,取肺组织,染色并观察其病理学变化;羟脯氨酸含量测定,判断肺纤维化模型制备是否成功并评估肺组织纤维化严重程度;Western Blot、免疫组化法检测内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP,间质组织标志物Vimentin,上皮组织标志物E-cadherin蛋白水平表达的变化。体外实验:体外培养人Ⅱ型肺泡上皮细胞株(A549细胞),并于无血清同步化处理24小时后给予TGF-β干预24小时,模拟体外肺纤维化病理改变及EMT相关细胞形态学变化,并于给予Ac-SDKP(80 mmol/L)干预24小时后收集细胞,细胞分组如下:正常对照组(N组)、TGF-β干预组(T组)、TGF-β+Ac-SDKP干预组(T+A组)、单独ac-sdkp干预组(a组)。使用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化并拍照,qrt-pcr检测各组细胞中grp78、chop、vimentin、e-cadherin等指标mrna水平表达的变化。结果:体内实验:1、肉眼观察:n组小鼠肺组织呈淡粉色,表面及切面光滑,未见结节形成及明显出血点;m组小鼠双肺色泽晦暗,表面及切面均可见散在小结节及大小不等出血点;p组小鼠肺组织表面亦可见上述异常表现,但较m组小鼠变化为轻。2、he及masson染色:m组小鼠肺组织出现明显纤维化改变。与m组相比,p组小鼠肺纤维化程度有所减轻,差异有统计学意义(p0.05)。3、羟脯氨酸含量测定(hyp):m组小鼠肺组织hyp含量较n组明显升高;p组较m组降低,而较n组仍有所升高,差异有统计学意义(p0.05)。4、免疫组化结果:(1)n组小鼠肺组织中,e-cadherin表达部位及表达量较多,m组较n组表达明显减少,p组e-cadherin阳性表达量居于n组与m组之间,差异有统计学意义(p0.05);(2)n组小鼠肺组织中,vimentin仅少量阳性表达且表达范围较小,而m组中,vimentin的表达量较n组明显增加且广泛表达于肺泡细胞胞浆及肺组织间质基质中,p组vimentin阳性表达量居于n组与m组之间,差异有统计学意义(p0.05);(3)chop及grp78广泛表达于支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞及血管内皮细胞,且m组表达量均高于n组,而p组表达量则介于n组与m组之间(p0.05)。5、westernblot结果:与n组比较,m组chop、grp78、vimentin表达量均升高;e-cadherin的表达量降低;而p组各指标蛋白阳性表达量均介于n组与m组之间,差异均有统计学意义(p0.05)。体外实验:1、a549细胞形态学变化:经tgf-β干预后,细胞呈纺锤样、成纤维细胞样形态改变。2、qrt-pcr结果:与n组比较,m组chop、grp78、vimentinmrna表达量均升高,e-cadherinmrna的表达量降低,而p组各指标mrna表达量均介于n组与m组之间,差异均有统计学意义(p0.05)。结论:在肺间质纤维化发病过程中,ac-sdkp可能通过抑制内质网应激(ers)减缓上皮-间质转化(EMT),从而发挥其抗肺间质纤维化的作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of Ac - SDKP on the development of idiopathic pulmonary fibrosis ( IPF ) by in vivo and in vitro experiments . Methods : Twenty - four healthy male C57BL / 6 mice ( 25 卤 2g ) were randomly divided into three groups : sham operation control group ( n = 8 ) , pulmonary fibrosis model group ( M group , n = 8 ) , pulmonary fibrosis + Ac - SDKP intervention group ( group P , n = 8 ) . The changes of expression of grp78 , CHOP , vimentin , e - cadherin in group M and group M were determined by Western Blot and immunohistochemistry . The expression of E - cadherin in group p group was significantly higher than that in n group ( p < 0.05 ) . The expression of e - cadherin in group p group was significantly higher than that in group n and m group ( p < 0.05 ) . Conclusion : In the pathogenesis of pulmonary interstitial fibrosis , ac - sdkp may play an important role in resisting pulmonary interstitial fibrosis by inhibiting the endoplasmic reticulum stress ( ers ) to slow the epithelial - mesenchymal transition ( EMT ) .

【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R563

【参考文献】