CXCR3基因在哮喘小鼠气道高反应性和气道炎症中的作用

发布时间：2018-03-20 20:03

  本文选题：趋化因子受体　切入点：CXCR3　出处：《延边大学》2012年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的： 支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与,Thl和Th2型细胞因子产生失衡有关,以气道高反应性为特征的气道慢性炎症性疾病。多种细胞趋化因子及其受体参与哮喘的气道炎症反应,CD8+T细胞在哮喘的气道高反应性(AHR)和过敏性肺部炎症反应中起重要作用。CXCL10(干扰素-γ诱导蛋白-10)主要表达于活化的CD8+T细胞,与它的受体CXCR3结合后,可吸引T细胞募集到肺组织。本实验通过CXCR3基因敲除小鼠,研究其在卵清蛋白(OVA)致敏的哮喘反应中的作用机制。 方法： 将64只野生型C57BL/6品系雄性小鼠和64只雄性CXCR3基因敲除小鼠分为4组：正常对照组1(WT/SAL组,32只C57BL/6WT小鼠);正常对照组2(KO/SAL组,32只C57BL/6KO小鼠)；哮喘组1(WT/OVA组,32只C57BL/6WT小鼠)；哮喘组2(KO/OVA,32只C57BL/6KO小鼠)。哮喘组均于第0d和第14d向小鼠腹腔内注射致敏液(50μg OVA和2.25mg氢氧化铝佐剂生理盐水)0.2ml,第25d起将小鼠置于透明密闭容器中,用1%的OVA溶液10ml进行雾化吸入,每日1次,每次20min,连续6d。正常对照组则均使用氢氧化铝佐剂混合生理盐水腹腔注射,生理盐水雾化吸入。所有各组小鼠均于末次激发末次雾化激发试验24h后处死。HE、PAS染色检测肺组织病理改变。流式细胞术检测肺泡灌洗液和肺组织CD8+T细胞和CD4+T细胞百分比。BCA法检测BALF上清总蛋白量。酶联免疫吸附试验检测小鼠肺泡灌洗液和肺组织IFN-γ、IL-4和CXCL10等细胞因子和趋化因子的表达。RT-PCR检测TNF-α、IFN-γ、IL-8(KC)、 TGF-β1和CXCL10等细胞趋化因子在小鼠肺组织mRNA中的表达。 结果： 雾化激发过程中WT/OVA组小鼠出现较明显的呼吸急促、烦躁不安、头面部瘙痒、腹肌抽搐等症状。与野生型小鼠(WT/OVA)相比,CXCR3基因敲除小鼠(KO/OVA)肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞计数均显著减少(P0.05),并且较野生型小鼠(WT/OVA)的BALF上清液总蛋白量减少,具有统计学意义(P0.01),即炎症程度较轻。HE、PAS染色均显示CXCR3基因敲除小鼠(KO/OVA)气道内过敏性炎症表现较野生型小鼠(WT/OVA)减轻。并且半定量分析显示野生型小鼠较CXCR3基因敲除小鼠的气道炎症水平明显增高,又显著性差异(P=0.045)。而正常对照组的肺组织结构正常,未见明显炎症反应。小鼠肺功能检查显示与CXCR3基因敲除小鼠(KO/OVA)相比,野生型小鼠(WT/OVA)在吸入浓度为25mg/ml乙酰甲胆碱后的气道反应性和气道阻力,比显著性增高(P0.05)。流式细胞术显示,CXCR3基因敲除小鼠的BALF中CD8+T细胞百分比较野生型小鼠明显降低(P=0.003)。在mRNA水平,CXCR3基因敲除小鼠肺组织中IFN-γ的表达较野生型小鼠明显上调,具有统计学意义(P0.05)。ELISA试验显示,CXCR3基因敲除小鼠的BALF中IFN-γ的浓度较野生型小鼠增高(P0.05)。而野生型小鼠BALF中的IL-4浓度较CXCR3基因敲除小鼠增高(P0.05)。 结论： 本试验利用OVA腹腔注射致敏,结合OVA持续雾化吸入激发成功制作了哮喘小鼠模型。CXCR3基因敲除后,OVA诱发的小鼠肺部过敏性炎症反应减轻。CXCR3通过募集CD8+T细胞和CD4+T细胞到达炎症部位,进一步启动炎症介质的释放,在哮喘气道炎症和气道高反应性方面起关键作用。因此,CXCR3可能作为治疗哮喘的新目标。
[Abstract]:Objective:
Bronchial asthma is caused by a variety of cells and cellular components involved in, Thl and Th2 cytokines imbalance, characterized by a chronic inflammatory airway disease with airway hyperresponsiveness. Airway inflammation of various cell chemotactic factor and its receptor in CD8+T cells in asthma, airway hyperresponsiveness of asthma (AHR) plays an important the role of.CXCL10 and allergic lung inflammation (interferon gamma inducible protein -10) is mainly expressed on activated CD8+T cells, combined with its receptor CXCR3, which can attract T cell recruitment to the lung tissue. The experiments of CXCR3 gene knockout mice, study the ovalbumin (OVA) sensitization reaction mechanism of asthma in.
Method锛，

本文编号：1640599