BMI指数与大鼠ALI模型的肺损伤程度相关性研究

发布时间：2018-04-02 07:21

  本文选题：BMI指数　切入点：Angptl2　出处：《重庆医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：了解不同级别肺损伤动物模型肺组织病理学评分及W/D差异；了解不同级别肺损伤动物模型外周血炎症因子TNF-α、IL-lβ水平表达变化及其差异基本规律；了解不同级别肺损伤动物模型外肺组织中NF-κBp65mRNA水平，NF-κBp65核转位比率三指标共同评价BMI导致表达的差异规律；通过W/D、肺损伤病理评分、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65五个指标联合评价肺损伤程度，并将BMI指数与肺损伤程度作相关性分析，期望证实BMI指数是发生ALI的独立危险因子；通过分析不同BMI指数组Angptl2mRNA与蛋白水平，从Angptl2是肥胖的关键性脂源性炎症因子角度出发，探讨BMI与ALI相关性的可能机制通路。 方法：健康雄性SD大鼠36只,体质量(168±31)g，由重庆医科大学动物实验中心提供，按完全随机原则分为4组（n=9），C组（空白对照组）、OA组（普通大鼠OA造模组）采用普通饲料喂养，C-H组（高脂肥胖对照组）、O-H组（高脂肥胖油酸造模组）采用高脂饲料（20%猪油，10%奶粉，10%鸡蛋，60%普通饲料）诱导肥胖模型。8周后测量体重指数BMI(Kg/m2)及血脂水平（mmol/L）。C组、C-H组采用尾静脉注射生理盐水作对照组，OA、O-H两组采用尾静脉注射油酸复制肺损伤模型,各组剂量均为0.1ml/kg，造模后4h通过观察造模后大鼠的呼吸频率、皮肤粘膜颜色、活动行为初步判断造模成功与否，采用3.5%水合氯醛充分麻醉大鼠（10ml/kg），颈静脉取血分离血浆备用；开胸后肉眼观察肺组织出血、水肿情况取右肺固定部分作湿重/干重比值(W/D)、肺组织冰冻切片及病理学观察，取左肺组织分装冻存于负80℃冰箱备用,作肺组织炎症因子含量TNF-α、IL-lβ及免疫荧光检测NF-κBp65核转位比率、半定量PCR法检测肺组织NF-κBmRNA表达水平；Realtimequantitative-PCR法定量检测肺组织Angptl2mRNA表达水平，Westernblot半定量检测肺组织Angptl2蛋白表达。 结果： 1.大鼠呼吸频率、皮肤粘膜、活动行为C组及C-H组大鼠一般情况好,精神状态可，呼吸平稳,频率分别为（44±12）、（42±8）次/分,无紫绀出现,未见死亡。OA组大鼠于造模后1~4h呼吸频率显著增加,达（98±13）次/分,全身毛发竖立，紫绀出现,未见死亡。0-H组大鼠造模后数分钟呼吸频率显著增加(130±22)次/分,全身毛发竖立肺部哮鸣音显著,口唇紫绀较OA组更为明显,4h内死亡一只。分别测得4组大鼠血脂、体重、身长,C组、OA组甘油三酯（TG）、BMI两指标差异没有统计学意义，C-H、O-H组TG及BMI指数较前两组显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.05) 2.肺组织湿/干重、肺组织形态学观察开胸后观察肉眼下，C组肺组织表面光滑，浅粉红色，无充血、水肿，C-H组可见肺组织较正常组肥大，表面可见黄色脂肪组织；OA模型组肺组织呈暗红色，可见广泛点状或灶状出血,病理可见肺水肿、肺出血、炎细胞浸润等肺损伤典型改变；O-H组肺组织明显增大成暗红色,部分部位略成黄白色，大片灶状区域，病理可见明显水肿，大量炎细胞浸润。参照文献对4组大鼠肺损伤病理学评分结果示，，C-H组、O-H组及OA组均较C组升高差异具有统计学意义，且O-H组与OA组相比差异同样具有统计学意义（P＜0.05），但从W/D数据显示O-H与OA两组差异并无统计学意义（P0.05） 3.各组血浆TNF-α、IL-1β含量差异肺组织匀浆上清液TNF-α、IL-1β的测定可评估肺组织炎症反应程度。在造模后4hOA、O-H两组TNF-αI、L-1β较对照组均明显升高，且O-H组较OA升高更为明显。 4.免疫荧光检测NF-κBp65核转位比率圆形绿色荧光代表NF-κBp65蛋白所在的阳性细胞图像，荧光标记主要浓集胞核区。C组阳性细胞少，OA模型组核转位阳性细胞增多，0-H组较OA组升高更为明显（见图2）。用ImageJ软件测定每组图片光密度值，O-H模型组光密度值高于OA组，差异有统计学意义（p0.05）;NF-ΚB电泳后显示在348bp处，O-H组NF-ΚBmRNA表达较OA组显著增加（p0.05）。 5.PCR半定量测定肺组织NF-κBp65mRNA表达量PCR结果显示，C组NF-κBp65mRNA灰度值最低，OA模型组NF-κBp65mRNA灰度值增加，两组之间差异具有统计学意义（p0.05）；O-H组较C-H组灰度值明显增加，差异同样具有统计学意义（p0.05））；同时O-H较OA组升高更为明显（p0.05）。 6.BMI指数分别与肺组织W/D、病理评分、血浆炎症因子TNF-α、IL-1β相关性分析BMI指数与上述指标均成正相关，与病理评分及IL-1β相关性最高，与W/D相关性不明显。未造模组：BMI与W/D：0.62、病理评分：0.78、TNF-α：0.83、IL-1β：0.84；造模组：BMI与W/D：0.29、病理评分：0.85、TNF-α：0.65、IL-1β：0.79。 7.Realtimequantitative-PCR法定量检测肺组织Angptl2mRNA表达水平,Westernblot法半定量检测肺组织Angptl2mRNA表达水平Angptl2在肺组织中呈阳性表达，油酸造模后，OH组与CO组呈明显升高状态,差异具有统一学意义。 8.免疫组化分析免疫组化结果显示：该蛋白主要集中在肺泡壁外侧或内侧，相同BMI水平，肺损伤组的Angptl2表达量增加，不同BMI水平，Angptl2在高BMI组即肺损伤程度严重组表达量增加；将OA组与O-H组相对比发现，在Angptl2的表达量越多的部位，肺泡壁塌陷程度越重、水肿液渗出越多，该蛋白在肺损伤程度重的组别表达更为广泛、表达量更高，这一结果与RT-PCR、WesternBlot结果相一致。 结论： 1）BMI的升高可导致肺损伤模型病理学评分、大鼠外周血炎症因子TNF-α、IL-lβ水平、肺组织中NF-κBp65mRNA水平升高； 2）BMI指数与肺损伤病理评分、TNF-α、IL-1β、NF-κBp65四个指标与肺损伤程度具有良好相关性，提示BMI指数可能是加重肺损伤的独立危险因素； 3）不同BMI指数组别Angptl2蛋白表达存在差异，BMI的升高与Angptl2表达量的升高成正相关性； 4）肺损伤模型中肺泡壁塌陷程度越重、水肿液渗出越多的部位，Angptl2表达量也越多，提示Angptl2可能是导致BMI指数与肺损伤程度呈正相关性的炎症蛋白。
[Abstract]:Objective : To investigate the pathological grading and W / D difference of lung tissues in lung injury models at different levels .
To investigate the expression of TNF - 伪 and IL - 1 in peripheral blood of rats with different levels of lung injury and their differences .
To investigate the level of NF - 魏B p65 mRNA and the nuclear translocation ratio of NF - 魏B P65 in lung tissues of different levels of lung injury .
The lung injury degree was evaluated by five indexes of W / D , pathological score of lung injury , TNF - 伪 , IL - 1尾 and NF - 魏B , and the correlation between BMI and lung injury was analyzed . It was expected to confirm that BMI was an independent risk factor for ALI ;
Based on the analysis of Angptl2mRNA and protein level in different BMI groups , the possible mechanism pathway of BMI and ALI was discussed from Angptl2 as the key lipid source inflammatory factor angle of obesity .

Methods : Thirty - six healthy male SD rats were randomly divided into four groups ( n = 9 ) , group C ( blank control group ) , OA group ( normal rat OA module group ) . The rats were fed with high fat diet ( 20 % lard , 10 % milk powder , 10 % eggs , 60 % ordinary feed ) .
After opening the chest , the lung tissue hemorrhage was observed with the naked eyes , the ratio of wet weight / dry weight ( W / D ) , lung tissue frozen section and pathology were observed . The left lung tissue was frozen and stored in the negative 80 鈩

本文编号：1699365