WISP1参与哮喘气道重塑机制的实验研究

发布时间：2016-11-12 18:27

  本文关键词：WISP1参与哮喘气道重塑机制的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

《重庆医科大学》 2014年

WISP1参与哮喘气道重塑机制的实验研究

杨明金  

【摘要】：研究背景： Wnt信号参与调控机体生长发育的诸多环节,其异常活化可以导致肿瘤、纤维增生和组织重塑等疾病的发生。Wnt诱导分泌蛋白1(WISP1)是Wnt信号通路的下游靶基因之一，WISP1高表达与器官损伤修复,以及心、肺、肝等脏器纤维化相关。此外，最近研究发现，WISP1基因多态性与哮喘患者肺功能改变密切相关。因此，我们推测WISP1在哮喘气道重塑的发生和发展中扮演重要角色。 目的： 本研究通过构建动物模型评估WISP1与哮喘气道重塑的关系，并通过体外实验深入探讨其具体作用及潜在机制。 方法： 通过雾化吸入卵清蛋白（OVA）构建哮喘气道重塑大鼠模型，PCR和免疫组化从基因转录水平和蛋白水平两个方面评估WISP1表达情况，再用抗WISP1中和抗体对大鼠预处理，评估气道重塑较前是否有所改善。为深入探讨WISP1的具体作用及潜在机制，体外细胞实验被进一步实施。重组人WISP1因子被用于刺激肺成纤维细胞，MTT法检测细胞增殖情况，Sircol CollagenAssay kit检测胶原释放情况，WesternBlotting分析Akt、GSK-3β等通路活化情况。用SH-5阻断Akt通路，进一步检测肺成纤维细胞增殖、胶原释放以及相关信号通路活化情况。 结果： 1.与对照组相比，哮喘气道重塑动物模型肺组织中WISP1水平显著上调（P＜0.05)。阻断WISP1表达后可部分抑制OVA诱导的哮喘气道重塑（P＜0.05)； 2.在体外WISP1可直接诱导肺成纤维细胞增殖，并呈时间依赖性（WISP1：3.47±0.15,48小时;8.17±0.15,72小时；对照组：2.50±0.15,48小时;5.07±0.25,72小时，P＜0.05)； 3.在体外WISP1可诱导肺成纤维细胞合成和分泌胶原蛋白(WISP1：18.4±3.1ng/cell，对照组；5.4±1.0ng/cell, P0.05)，并显著上调p-Akt和p-GSK-3β水平（P＜0.05)； 4. SH-5能部分抑制WISP1诱导的肺成纤维细胞增殖和胶原释放，并下调p-Akt和p-GSK-3β水平（P＜0.05)。 结论： 1.OVA诱导的哮喘气道重塑动物模型中，WISP1表达水平明显增高，耗损WISP1因子后能在一定程度上减轻OVA诱导的气道重塑； 2.在体外，重组人WISP1因子能直接诱导肺成纤维细胞增殖和胶原释放，其机制可能与WISP1激活Akt/GSK-3β通路有关。

【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R562.25
【目录】：

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本文编号：172484