抗TNF-α和IL-1β IgY抗体治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的研究

发布时间：2018-05-03 17:43

  本文选题：过敏性支气管哮喘 + 豚鼠　； 参考：《南昌大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的： 探讨抗TNF-α和IL-1β IgY抗体雾化吸入治疗过敏性支气管哮喘的作用机制。 方法： 1、应用卵清蛋白（OVA）雾化吸入法建立Hartley豚鼠过敏性支气管哮喘模型。 2、雾化吸入抗TNF-α和IL-1β IgY抗体及布地奈德混悬液。 3、随机分为五组：正常对照组（C组）；过敏性支气管哮喘组（M组）；0.1%抗TNF-α和IL-1β IgY抗体治疗组（Z1组）；1.0%抗TNF-α和IL-1β IgY抗体治疗组（Z_2组）；布地奈德混悬液治疗组（常规药物阳性治疗组）（Z_3组）。 4、观察各组用药治疗前后1h的活动、进食、喷嚏、抓鼻、咳嗽、呼吸频率和呼吸深度等一系列变化。 5、所有实验组豚鼠于末次治疗结束后第2、4、8、24小时等4个时间点处死，取右肺做病理切片，经HE染色，观察肺组织病理变化。 6、所有实验组豚鼠于末次治疗结束后第2、4、8、24小时等4个时间点处死，左肺行支气管肺泡生理盐水灌注，收集肺泡灌洗液（BALF）测定细胞因子及IgE含量。 7、采用双抗夹心ELISA方法检测BALF中TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-16和TGF-β等细胞因子和IgE的含量。 8、应用SPSS19.0统计软件进行统计分析，数据采用X±SD表示。对各组不同时间之间先进行χ~2正态分布和方差齐性检验，若符合正态分布和方差齐性，则采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,多重比较再采用LSD检验。若不符合正态分布和方差不齐性，则采用多重秩和检验，多重比较用Mann-Whiteney法。相关性检验使用Pearson方法。取P0.05表示差异有显著性。进行统计学分析。 结果： 1、应用卵清蛋白（OVA）雾化吸入法建立Hartley豚鼠过敏性支气管哮喘模型成功。 2、动物行为学观察：模型组（M组）动物在雾化吸入致敏后表现比较兴奋，烦躁不安，摩擦皮毛，抓鼻、喷嚏、咳嗽现象；0.1%抗TNF-α和IL-1β IgY抗体治疗组（Z_1组）、1.0%抗TNF-α和IL-1β IgY抗体治疗组（Z_2组）、布地奈德混悬液（常规药物阳性治疗组）（Z_3组）动物进食、饮水、活动在治疗后较M组动物明显改善。 3、肺组织病理学检查： C组各时间点下的肺组织在光镜下可见气道壁和肺泡壁结构完整，毛细血管密集，管腔通畅；肺泡腔内清洁透亮，肺泡上皮细胞排列有序；肺泡上皮与毛细血管及其间质成份结构完整并构成完整的肺泡呼吸膜；各级支气管周围未见炎性细胞浸润。 M组动物各时间点下的肺支气管、肺泡壁和肺泡腔结构不完整；毛细血管发生扩张，白细胞明显增多；肺泡腔发生大面积破裂，腔内可见渗出液，包括坏死的肺泡上皮细胞，并有白细胞浸润；支气管管壁平滑肌细胞肥大和增生，基底膜显著增厚并玻璃样变；肺间质有淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性细胞浸润。 Z_1组和Z_2组肺泡管和肺泡壁结构结构较完整；肺泡形态较M组规则，肺泡腔内偶见少量炎症细胞游离于其中；肺泡毛细血管内炎性细胞较M组明显减少；支气管粘膜有部分增厚现象，管壁平滑肌细胞较M组明显减少；支气管管腔内及管腔旁仅可见少量炎性细胞浸润。 Z_3组和M组比较肺泡结构破坏减少。Z_1组、Z_2组、Z_3组之间相比较形态结构未见明显的差别。 4、BALF细胞因子变化： 2h：M组各细胞因子含量高于C组（P0.05），IL-1含量高于其他各组（P0.05）；TNF-α含量高于Z_1、Z_2组（P0.05）；IL-16含量高于Z_1、Z_3组（P0.05）；IL-4、IL-8、TGF-β含量高于Z_3组（P0.05）；IgE含量高于Z_1组（P0.05）。Z_1、Z_2、Z_3各组IL-1、IL-6、IL-10含量各组间无显著性差异；Z_3组IL-4、IL-13含量低于Z_1、Z_2组（P0.05），而TNF-α含量高于Z_1、Z_2组（P0.05）；Z_2组IL-16、IgE含量高于Z_1、Z_3组（P0.05）；Z_3组TGF-β含量低于Z_1、Z_2组（P0.05）。 4h：M组IL-1、IL-4、IL-6、IgE含量高于其他各治疗组（P0.05）； IL-8、IL-13、TNF-α含量高于Z_2、Z_3组（P0.05）；IL-16含量高于Z_1、Z_3组（P0.05）；TGF-β含量高于Z_1、Z_2组（P0.05）。Z_1、Z_2、Z_3各组在IL-1、IL-13、IgE含量各组间无显著性差异；Z_2组IL-4、IL-6含量高于Z_1组（P0.05）；Z_1组IL-8、含量高于Z_2、Z_3组（P0.05）；IL-16含量Z_2组显著高于Z_1、Z_3组（P0.05），而TGF-β含量显著低于Z_1、Z_3组（P0.05）。Z_3组TNF-α低于Z_1、Z_2组（P0.05）。Z_3组TNF-α、TGFβ低于Z_1、Z_2组（P0.05）。 8h：M组在IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β含量均显著高于Z_1、Z_2、Z_3组（P0.05），IgE显著高于Z_2、Z_3组（P0.05）。Z_1、Z_2、Z_3各组在IL-1、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16含量各组间无显著性差异；Z_3组IL-4含量显著低于Z_1组（P0.05）；Z_3组TNF-α含量显著低于Z_1组，，高于C组、Z_2组（P0.05）；Z_2组TNF-α、IgE含量显著低于Z_1组（P0.05）。 24h：M组在IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β、IgE仍显著高于C组（P0.05）；IL-1、IL-4、IL-6、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β、IgE显著高于Z_3组（P0.05）；IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TGF-β、IgE显著高于Z_2组（P0.05）；IL-4、TGF-β也显著高于Z_1组（P0.05）。Z_3组在IL-1含量显著低于Z_1、Z_2组（P0.05）；TNF-α含量显著高于Z_1、Z_2组（P0.05）；IL-4含量显著高于Z_2组（P0.05）；IL-6、IL-13、IgE含量低于Z_1组（P0.05）。Z_2组在IL-4、IL-6、IL-13、IL-16、IgE含量低于Z_1组（P0.05）。IL-1在Z_1、Z_2组含量高于C组（P0.05），IL-4在Z_2组含量高于C组（P0.05），IL-13、IL-16在Z_1组含量高于C组（P0.05），TNF-α在Z_2、Z_3组含量显著高于C组（P0.05），IgE在Z_1、Z_2、Z_3组含量高于C组（P0.05）。 IL-10在2h、4h、8h、24h各组之间无统计学差异。但在M组IL-4/IL-10比值在2h、4h、8h、24h分别为0.86、1.08、0.86、0.83，均高于C组在相应时间点的IL-4/IL-10比值0.54、0.54、0.48、0.73。Z_1组IL-4/IL-10比值在2h、4h、8h、24h分别为1.34、0.56、0.71、0.75；Z_2组IL-4/IL-10比值在2h、4h、8h、24h分别为0.98、0.68、0.53、0.57，Z_1组、Z_2组2h高于M组（0.86），其他时间点均低于M组（P0.05）；Z_3组IL-4/IL-10比值在2h、4h、8h、24h分别为0.74、0.67、0.57、0.93，除了治疗后期的24h高于M组（0.83），其他时间点均低于M组（P0.05）。从IL-4/IL-10比值看Z_1、Z_2、Z_3组均低于M组，稍高于C组，说明Z_1、Z_2、Z_3组的IL-10相对提高，出现过敏性炎症的抑制。 5、BALF中细胞因子的相关性： BALF中TNF-α与IL-1、IL-4、IL-8、IL-13、IL-16、IgE含量呈正相关（P0.05）。BALF中IL-1与IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β、IgE呈正相关（P0.05）。BALF中IL-4与IL-1、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β、IgE呈正相关（P0.05）。BALF中IL-6与IL-1、IL-4、IL-8、IL-13、IL-16、TGF-β、IgE呈正相关（P0.05）。BALF中IL-8与IL-1、IL-4、IL-6、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β、IgE呈正相关（P0.05）。BALF中IL-10的变化与其他各细胞因子及IgE变化无相关性。BALF中IL-13与IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-16、TNF-α、TGF-β、IgE呈正相关（P0.05）。BALF中IL-16与IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、TNF-α、TGF-β、IgE呈正相关（P0.05）。BALF中IgE与IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β呈正相关（P0.05）。BALF中TGF-β与IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、IgE呈正相关（P0.05）。 结论： 1、本文从动物行为学表现、组织病理学切片观察、以及致炎细胞因子（IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β）和抑炎细胞因子（IL-10）在BALF的含量变化证明，抗TNF-α和IL-1β IgY抗体雾化治疗能够有效地控制过敏性支气管炎症症状和体征，以及支气管肺组织炎症病理反应。 2、初步揭示了各种致炎和抑炎细胞因子在过敏性支气管肺部炎症中及病理过程中的变化及相互关系，在BALF中的IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TGF-β等细胞因子及IgE与TNF-α、IL-1的变化具有相关性，并初步证明TNF-α和IL-1β不但在过敏性支气管肺炎病理过程中对组织产生损伤，而且是作为炎症级联反应的启动因子。 3、通过抗TNF-α和IL-1β IgY抗体雾化治疗OVA致敏的支气管哮喘模型豚鼠证明，其减少了肺组织局部IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16和TGF-β等致炎细胞因子的分泌，减轻了过敏性支气管哮喘的病理损害的严重程度，减缓炎症症状和体征，治疗疗效与布地奈德相似。故抗TNF-α和IL-1β IgY抗体雾化吸入治疗有可能成为新的过敏性支气管哮喘的手段，其治疗时间以3次/天为宜。 4、BALF中IL-1与IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β、IgE呈正相关；TNF-α与IL-1、IL-4、IL-8、IL-13、IL-16、IgE含量呈正相关。
[Abstract]:Objective:
Objective to investigate the mechanism of aerosol inhalation of anti TNF- alpha and IL-1 beta IgY on allergic bronchial asthma.
Method锛

本文编号：1839460