黄芩苷对大鼠肺成纤维细胞及肌成纤维细胞CTGF和α-SMA表达的影响

发布时间：2018-05-21 18:49

  本文选题：黄芩苷 + 肺成纤维细胞　； 参考：《河北医科大学》2013年硕士论文

【摘要】：目的：肺纤维化的病理特点是肺肌成纤维细胞异常增多，过度的细胞外基质沉积。α-平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin, α-SMA)是肌成纤维细胞（myofibroblast，MFB）的标志物。转化生长因子-β1（transformin growthfactor-beta，TGF-β1）是刺激成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的主要细胞因子。结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）是TGF-β1的下游因子。肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞时，CTGF表达明显增加。黄芩苷(Baicalin)是从中草药黄芩中分离出来的一种黄酮类化合物，具有抗纤维化作用。但黄芩苷对于离体肺成纤维细胞和肌成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达的影响目前尚未见报道。因此，本实验通过离体培养大鼠肺成纤维细胞及肌成纤维细胞，观察黄芩苷对肺成纤维细胞及肺肌成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达的影响，，为黄芩苷在临床肺纤维化中的防治提供研究资料。 方法:体外分离培养原代雄性SD大鼠(150-170g)肺成纤维细胞；用TGF-β诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞；MTT法测定黄芩苷对肺成纤维细胞及肌成纤维细胞存活率的影响；Western Blot法测定肺成纤维细胞及肌成纤维细胞CTGF及α-SMA的蛋白表达。 结果： 1黄芩苷对肺成纤维细胞及肌成纤维细胞存活率的影响 肺成纤维细胞是指正常培养的无TGF-β诱导的肺成纤维细胞，肌成纤维细胞为肺成纤维细胞经TGF-β诱导48h且α-SMA表达增加的细胞，对照组为无药物干扰的。与对照组(0μmol/L)相比，10、20和40μmol/L的黄芩苷对肺成纤维细胞及肌成纤维细胞的存活率均无明显影响（P0.05）,80、160μmol/L浓度的黄芩苷抑制肺成纤维细胞及肌成纤维细胞的存活率（P0.01）。提示10-40μmol/L浓度的黄芩苷对肺成纤维细胞及肌成纤维细胞无明显毒性作用。 2黄芩苷对肺成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达的影响 与对照组(0μmol/L)相比,10、20、40μmol/L浓度的黄芩苷对肺成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达均无统计学意义（P＞0.05），80、160μmol/L浓度的黄芩苷则抑制肺成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达（P＜0.01）。这提示10-40μmol/L黄芩苷既不增加肺成纤维细胞CTGF表达也不诱导其向肌成纤维细胞转化，80-160μmol/L黄芩苷则抑制其表达。 3黄芩苷对肺肌成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达的影响 TGF-β诱导后的细胞与正常肺纤维细胞相比，CTGF及α-SMA蛋白表达明显升高，提示体外肌成纤维细胞诱导成功。与对照组相比(0μmol/L)，10、20、40、80、160μmol/L浓度的黄芩苷呈剂量依赖性的抑制肌成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达（P＜0.01），提示黄芩苷呈剂量依赖性促进肌成纤维细胞去分化为成纤维细胞。 结论： 110-40μmol/L浓度的黄芩苷对肺成纤维细胞及肌成纤维细胞存活率无影响，80、160μmol/L浓度的黄芩苷则表现出毒性作用。 310-40μmol/L浓度的黄芩苷既不增加肺成纤维细胞CTGF表达也不诱导其向肌成纤维细胞转化，80-160μmol/L浓度的黄芩苷抑制肺成纤维细胞CTGF及α-SMA蛋白表达。 4黄芩苷呈剂量依赖性的（10、20、40、80、160μmol/L）抑制肌成纤维细胞CTGF表达，并促进其去分化为成纤维细胞。
[Abstract]:Objective: the pathological characteristics of pulmonary fibrosis are abnormal increase of pulmonary myofibroblast and excessive extracellular matrix deposition. Alpha smooth muscle actin (smooth muscle actin, alpha -SMA) is a marker of myofibroblast (myofibroblast, MFB). Transforming growth factor - beta 1 (transformin growthfactor-beta, TGF- beta 1) is a stimulant to fibroblast cells. The main cytokine of the transformation of myofibroblast. Connective tissue growth factor (CTGF) is the downstream factor of TGF- beta 1. When pulmonary fibroblasts are converted into myofibroblast, the expression of CTGF is significantly increased. Baicalin (Baicalin) is a kind of flavonoids separated from the Chinese herbal medicine baicalin. However, the effect of Baicalin on the expression of CTGF and alpha -SMA protein in isolated lung fibroblasts and myofibroblasts has not yet been reported. Therefore, the experiment was conducted to observe the effects of Baicalin on pulmonary fibroblast and pulmonary myofibroblast CTGF and alpha -SMA protein by cultured rat lung fibroblasts and myofibroblast in vitro. The influence of Baicalin on prevention and treatment of clinical pulmonary fibrosis is provided.
Methods: the primary male SD rat (150-170g) lung fibroblasts were isolated and cultured in vitro, and the pulmonary fibroblasts were transformed into myofibroblast with TGF- beta, and the effects of Baicalin on the survival rate of pulmonary fibroblasts and myofibroblasts were measured by MTT, and the Western Blot method was used to determine the CTGF and alpha -SMA of pulmonary fibroblasts and myofibroblasts. Protein expression.
Result锛

本文编号：1920342