肺泡II型上皮细胞凋亡相关microRNA的筛选及验证

发布时间：2018-05-29 22:40

  本文选题：肺泡Ⅱ型上皮细胞 + 凋亡　； 参考：《遵义医学院》2013年硕士论文

【摘要】：目的：筛选并验证肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ epithelial cell, AEC-Ⅱ)凋亡相关microRNA(miRN A)。 方法：(1)模型建立：分离、纯化、鉴定并原代培养AEC-H36h,0.5mmol/L H2O2诱导建立AEC-Ⅱ凋亡模型。(2)凋亡检测：分别于建模前(TO)、建模后2.5h(T2.5)、6h(T6)、12h(T12)及24h(T24)收集细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞早期凋亡率,透射电子显微镜(TEM)检测细胞凋亡形态。(3)基因芯片筛选凋亡相关miRNA:分别于TO及T24收集细胞行miRNA芯片检测,比较两个时间点miRNA表达谱的差异,并从差异表达的miRNA中筛选凋亡相关miRNA=(4) Real-time PCR验证凋亡相关miRNA:选取3个凋亡相关miRNA行Real-time PCR检测,以验证基因芯片结果的准确性。(5)生物信息学方法预测靶基因：综合运用TargetScan、miRecords、TarBase、miRTarBase预测经验证的miRNA的靶基因,并从预测结果中筛选凋亡相关靶基因。 结果：(1)TEM鉴定AEC-Ⅱ：可见特征性的微绒毛及嗜锇性板层小体。(2)TEM检测细胞凋亡形态：可见胞质回缩,染色质凝聚、边聚,细胞表面微绒毛稀少,嗜锇性板层小体排空。(3)FCM检测细胞早期凋亡率：H202建模后细胞凋亡率显著增加,且随建模时间延长而逐渐上升。(4)基因芯片筛选凋亡相关1miRNA:与TO相比,T24细胞伴有多种miRNA的差异表达：28个miRNA表达明显上调,10个1miRNA表达明显下调,其中rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-200a/c-3p及rno-miR-21-5p等13个miRNA与凋亡密切相关。(5)Real-time PCR验证凋亡相关miRNA:选取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34c-5p、rno-miR-21-5p进行Real-time PCR检测,三者表达水平均明显下调,结果与芯片结果一致。(6)生物信息学方法预测靶基因：选取rno-miR-449a-5p、rno-miR-34b/c-5p、rno-miR-21-5p进行靶基因预测,预测结果提示：rno-miR-449a-5p的靶基因可能是Ccne2; rno-miR-34b/c-5p的靶基因可能是Bcl2; rno-miR-21-5p的靶基因可能有Bcl2、Pdcd4、PTEN及Fasl。 结论：(1)筛选并验证了AEC-Ⅱ凋亡相关miRNA。(2)miR-34家族可能是AEC-Ⅱ凋亡调控的主要参与者。(3) rno-miR-21-5p可能是AEC-Ⅱ内重要的抗凋亡基因。
[Abstract]:Objective: to screen and verify the apoptosis of alveolar type 鈪，

本文编号：1952757