DAPT对肺成纤维细胞表型转化中Wnt信号通路影响研究

发布时间：2016-12-03 14:45

  本文关键词：DAPT对肺成纤维细胞表型转化中Wnt信号通路影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

《南昌大学医学院》 2013年

DAPT对肺成纤维细胞表型转化中Wnt信号通路影响研究

龚文颖  

【摘要】：目的： 研究γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路后，Wnt信号通路中的wnt1、β-catenin及肌成纤维细胞标志因子α-SMA的表达变化，探讨Wnt/-catenin信号通路与Notch信号通路之间存在直接或间接的相互作用以及Wnt/-catenin信号通路在DAPT抑制肺成纤维细胞表型转化中的作用表达。 方法： （1）从出生2-3天SD大鼠的幼鼠中取得肺组织，采用胰酶消化法分离培养出肺成纤维细胞，并使用波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学方法检测培养至第三代肺成纤维细胞的纯度；（2）予无血清的DMEM培养基同步培养细胞24h，并将其分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组；（3）分别在TGF-β1组和TGF-β1+DAPT组中加入5ng/ml TGF-β1诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，并在TGF-β1+DAPT组中加入500nmol/L的DAPT抑制纤维细胞增殖，并作用于肺成纤维细胞24h，观察其形态学改变；（4）分别采用RT-PCR法检测α-SMA、wnt1及β-catenin的mRNA表达变化，Western blot法检测β-catenin的蛋白表达变化；（5）采用SPASS13.0统计软件进行统计学分析，两样本均数间比较采用t检验，多样本间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果： （1）Vimentin免疫细胞化学检测：几乎所有第三代细胞胞质内均可见棕黄色颗粒，证明使用胰酶消化至第三代细胞几乎全为肺成纤维细胞；（2）α-SMAmRNA表达：对照组α-SMA mRNA值（0.3850.015）、TGF-β1组（0.615±0.025）、TGF-β1+DAPT组（0.3450.027），其中TGF-β1组α-SMA mRNA值较对照组和TGF-β1+DAPT组明显升高，差异有统计学意义（p0.05），但对照组较TGF-β1+DAPT组无明显差异，即差异无统计学意义（p0.05）；（3）wnt1mRNA值表达：对照组wnt1mRNA值（0.233±0.005）、TGF-β1组（0.257±0.010）、TGF-β1+DAPT组（0.209±0.016），可知TGF-β1组wnt1mRNA值较对照组和TGF-β1+DAPT组显著升高，差异有统计学意义（p0.05）；（4）β-catenin mRNA和蛋白表达：对照组β-catenin mRNA和蛋白相对吸光光度值（0.984±0.031和0.352±0.023）、TGF-β1组（1.248±0.021和0.431±0.014）、TGF-β1+DAPT组（0.895±0.056和0.102±0.024），可见TGF-β1组较对照组和TGF-β1+DAPT组明显升高，，差异有统计学意义（p0.05）。 结论： （1）TGF-β1可诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，在转化过程中α-SMA、β-catenin、wnt1表达增高；（2）DAPT阻断Notch信号通路后，影响了成纤维细胞表型转化中Wnt/β-catenin信号通路，下调α-SMA、β-catenin、wnt1的mRNA及蛋白表达；（3）Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间可能存在相互关系。

【关键词】：
【学位授予单位】：南昌大学医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R563
【目录】：

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本文编号：203352