青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化为间质细胞过程的影响

发布时间：2018-06-18 13:29

  本文选题：青蒿琥酯 + TGF-β1　； 参考：《桂林医学院》2013年硕士论文

【摘要】：目的：特发性肺纤维化是以间充质细胞增生和细胞外基质异常沉积为特点的渐进性疾病，正常肺组织主要由肺泡上皮细胞组成，肺泡上皮细胞分Ⅰ型和Ⅱ型。肺泡Ⅱ型上皮细胞有干细胞特性，可在细胞因子TGF-β1的作用下转分化为间质细胞（EMT），表达间质细胞表型标志物肌动蛋白（ACTA2）和V-波形蛋白(Vim)，从而加快肺纤维化进程，其可能机制为活化TGF-β1底物Smad、P38MAPK。青蒿琥酯为传统的抗疟疾药，前期研究证实其有抗纤维化作用。本研究拟用青蒿琥酯为工具药，探讨在青蒿琥酯作用下对TGF-β1诱导的EMT过程的影响及其可能机制，从而研究青蒿琥酯与肺纤维化的关系。 方法：实验分两部分。第一部分研究青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡上皮-间质细胞转分化过程中TGF-β1/smad通路影响的剂量效应及时间效应：体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）；预实验检测TGF-β1诱导浓度；MTT法检测青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞12小时、24小时、48小时后的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50），根据IC50选择青蒿琥酯干预浓度；细胞分6组（剂量效应），①空白组；②TGF-β1（3ng/ml）组；③TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(1ug/ml)组；④TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(2ug/ml)组；⑤TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(4ug/ml)组；⑥TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(8ug/ml)组，培养24小时后，在倒置显微镜下观察细胞形态；收集细胞，提取总RNA，RT-PCR法检测各组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim的mRNA表达情况；提取总蛋白，Western bloting法检测各组P-Smad3、Smad7、ACTA2、Vim蛋白表达情况；细胞分成4组（时间效应），①空白组（1%FBS）；②TGF-β组（3ng/ml）；③TGF-β（3ng/ml）联合青蒿琥酯（1ug/ml）组；④青蒿琥酯组（1ug/ml），培养12、24、48小时后；收集细胞，提取总RNA， RT-PCR法检测各组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim的mRNA表达情况；培养24小时后，提取总蛋白，Western bloting法检测各组P-Smad3、Smad7、ACTA2、Vim蛋白表达情况。 第二部分研究不同剂量的青蒿琥酯对TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转分化过程中TGF-β1/P38MAPK通路的影响：体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN）；细胞分6组，①空白组；②TGF-β1（3ng/ml）组；③TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(1ug/ml)组；④TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(2ug/ml)组；⑤TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(4ug/ml)组；⑥TGF-β1（3ng/ml）联合青蒿琥酯(8ug/ml)组，培养24小时后，收集细胞，提取总RNA，RT-PCR法检测各组P38MAPK、ACTA2、Vim mRNA表达情况；提取总蛋白，Western bloting法检测各组P38MAPK、ACTA2、Vim蛋白表达情况。 结果：第一部分：青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞12小时后无抑制作用，24小时后的IC50为8.86ug/ml，48小时IC50为5.04ug/ml；镜下观察结果示与正常组相比，TGF-β1组RLE-6TN细胞由铺路石状上皮形态变成梭形、纺锤形，而且其细胞间隙略变大，青蒿琥酯作用于TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞24小时后，与TGF-β1组比较，细胞的梭形结构减少，部分恢复铺路石状上皮形态，但细胞之间连接仍松散，其中TGF-β1联合青蒿琥酯1ug/ml组表现最明显；RT-PCR及Western bloting结果示与空白组比较，TGF-β1组Smad3、Smad7、ACTA2、Vim mRNA及蛋白均表达增加（P0.05）；与TGF-β1组比较，，TGF-β1联合青蒿琥酯组Smad7mRNA及蛋白均表达增加（P0.05）；Smad3、ACTA2、VimmRNA表达降低（P0.05），P-Smad3、ACTA2、Vim蛋白表达降低（P0.05），作用剂量为1ug/ml，作用24小时表达最明显。 第二部分：RT-PCR及Western bloting结果示与空白组比较，TGF-β1组P38MAPK、ACTA2、Vim mRNA及蛋白均表达增加（P0.05）；与TGF-β1组比较，P38MAPK、ACTA2、Vim mRNA及蛋白均表达降低（P0.05）。 结论：1.TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞转分化为间质细胞（EMT）。 2.青蒿琥酯可在一定程度上抑制TGF-β1诱导的EMT过程，其可能机制为上调Smad7mRNA及蛋白表达，下调Smad3、P38MAPK mRNA及蛋白的表达，抑制Smad3蛋白磷酸化。 3.青蒿琥酯具有抗纤维化作用，其可能机制为抑制TGF-β1诱导的EMT过程。
[Abstract]:Objective : Idiopathic pulmonary fibrosis is a progressive disease characterized by the abnormal deposition of mesenchymal cell hyperplasia and extracellular matrix . The normal lung tissue consists of alveolar epithelial cells . The alveolar epithelial cells are classified as type 鈪

本文编号：2035646