甘草酸单铵盐对烟草烟雾暴露下单核细胞糖皮质激素抵抗的影响

发布时间：2016-12-20 08:11

  本文关键词：甘草酸单铵盐对烟草烟雾暴露下单核细胞糖皮质激素抵抗的影响，由笔耕文化传播整理发布。

《广西医科大学》 2014年

甘草酸单铵盐对烟草烟雾暴露下单核细胞糖皮质激素抵抗的影响

张扬  

【摘要】：目的探讨甘草酸单铵盐(glycyrrhizic acid ammonium salt，GA)对烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract，CSE)刺激下THP-1细胞糖皮质激素抵抗的作用及其减轻激素抵抗的可能机制。 方法以THP-1细胞（人单核细胞白血病细胞）为研究对象进行体外培养，四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）法确认不同浓度CSE（体积分数分别为5%、10%、20%）及GA（100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L）在不同时间点（24h、48h、72h）对细胞生长的影响，以确定其作用于THP-1细胞的合适浓度。（1）为检测各组细胞培养上清白细胞介素-8（interleukin8，IL-8）的含量及HDAC2表达，将培养的细胞分为：对照组、CSE组及CSE+GA组。CSE+GA组以GA预孵育THP-1细胞1h后给予CSE刺激过夜，之后给予不同浓度地塞米松（10-5-10-11mol/L）孵育1小时后，予肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor α，TNF-α）刺激后过夜，CSE组除不用GA外，其余干预措施与GA组相同，对照组仅给予不同浓度激素及TNF-α。以酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbentassay，ELISA）检测法测定各组细胞培养上清白细胞介素-8（interleukin8，IL-8）的含量，并用蛋白印迹(Western blotting，WB)法分析细胞内HDAC2的表达。(2)为研究GA对糖皮质激素抵抗的作用机制，将细胞分为空白对照组、错义寡核苷酸链（scrambled oligonucleotide，SC）空转组，HDAC2-siRNA转染组、HDAC2-siRNA+GA组。HDAC2-siRNA+GA组用脂质体为载体，将构建好的含组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase2，HDAC2）沉默RNA序列的质粒（HDAC2-siRNA）转染细胞，给予含目的基因HDAC2-siRNA的质粒在LipofectamineTM2000介导下转染细胞，转染48小时后加入GA孵育细胞过夜，而错义寡核苷酸链（scrambled SC）空转组给予不含HDAC2-siRNA的空质粒转染细胞，其余干预措施与HDAC2-siRNA+GA组相同。空白对照组不予任何干预措施，以实时荧光定量PCR（real-time quantitative polymerasechain reaction，qRT-PCR）法检测HDAC2mRNA的表达及WB法检测糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor α，GR-α)、核因子NF-κB（P65）（nuclear factor κB）、HDAC2的表达情况。并分析这些指标之间的相关性。数据采用SPSS16.0统计软件进行统计分析。 结果（1）浓度为5%、10%（体积分数）的CSE及浓度为100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的GA对THP-1细胞生长无明显影响；（2）CSE+GA组的地塞米松对IL-8抑制率明显高于CSE组，但低于对照组（P＜0.05）；（3）GA+CSE组地塞米松半数抑制浓度（IC50-Dex）低于CSE组，而高于对照组（P＜0.05）；(4) HDAC2-siRNA转染细胞48h后mRNA及HDAC2蛋白表达均明显低于对照组及空转组，，而加用GA后表达量均明显上升（P＜0.05）；对照组和空转组差别无统计学意义（P＞0.05）；（5）CSE组GR-α的表达量较对照组明显降低，而NF-κB的表达明显高于对照组，加用GA后GR-α表达量升高,NF-κB（P65）蛋白表达降低（P＜0.05）；（6）GR-α与NF-κB（P65）的表达水平呈负相关（r=-0.697，P＜0.01）；HDAC2蛋白表达与NF-κB（P65）的表达水平呈负相关（r=-0.667，P＜0.01）而HDAC2与GR-α的蛋白表达水平上呈正相关（r=0.646，P＜0.01）。 结论（1）体外培养的THP-1细胞经CSE刺激后，其对地塞米松的敏感性降低，说明存在糖皮质激素抵抗现象。（2）GA可能通过上调HDAC2及GR-α表达，减少NF-κB的活性，减轻氧化负荷下THP-1细胞的糖皮质激素抵抗。

【关键词】：
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9
【目录】：

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