Sirt6修饰的骨髓间充质干细胞对特发性肺纤维化微环境的体外研究和生物信息学分析

发布时间：2024-07-06 22:53

　　背景与目的:特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种常见的呼吸内科疾病,通常表现为肺功能下降,渐进性劳力性呼吸困难,咳嗽少痰,发绀,出现胸痛及杵状指,病情进一步发展较为严重的患者最终可能会死于呼吸衰竭,通常IPF患者疾病诊断后的生存时间均不足5年。近年来的研究指出IPF疾病的发生和发展具有流行病学的部分特征,存在家族易感性,与基因突变相关等,目前大多数的机制研究都表明IPF的发生及进展过程是上皮细胞损伤和异常损伤修复途径的激活所导致的,这种损伤后持续的上皮异常修复使得上皮细胞不断地向间质细胞发生转变,另外在细胞的转变过程中也会分泌其他生长因子,例如转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、血小板衍生细胞因子(platelet-de-rived growth factor,PDGF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等,这些作用于多条信号通路的细胞因子的增加使得信号通路也过度激活,造成肌成纤维细胞在间质中过度沉积,加速疾病...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 前言
    1.1 特发性肺纤维化概述
    1.2 骨髓间充质干细胞
    1.3 Sirt6 基因
    1.4 研究问题和目的
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 其他
        2.1.4 实验试剂
    2.2 主要试剂的配制
        2.2.1 10%水合氯醛溶液的配制
        2.2.2 10%BMSCs完全培养基
        2.2.3 10%DMSO BMSCs冻存液
        2.2.4 1×电泳液
        2.2.5 1×转膜缓冲液
        2.2.6 1×TBST缓冲液
        2.2.7 5%脱脂奶粉封闭液
        2.2.8 细胞蛋白提取裂解液
        2.2.9 10%SDS溶液
        2.2.10 10%过硫酸铵
        2.2.11 SDS-PAGE的凝胶配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 IPF与 SIRT6 之间的联系
        2.3.2 BMSCs的体外分离培养和鉴定
        2.3.3 SIRT6 慢病毒侵染大鼠BMSCs
        2.3.4 Western Blot法检测慢病毒转染BMSCs后 SIRT6 蛋白表达
        2.3.5 qPCR检测慢病毒转染BMSCs后 SIRT6 mRNA表达
        2.3.6 TGF-β1 诱导BMSCs肺纤维化预实验
    2.4 统计学方法
第3章 结果
    3.1 基于GEO数据库的SIRT6 变化规律
    3.2 BMSCs的形态观察及鉴定
    3.3 慢病毒侵染细胞的最佳MOI值
    3.4 LV-GFP和 LV-SIRT6 侵染BMSCs
    3.5 Western-Blot检测转染后BMSCs中 SIRT6 的表达
    3.6 QPCR检测慢病毒转染后SIRT6 基因的表达
    3.7 QPCR检测不同浓度TGF-β1 刺激BMSC后 SIRT6 基因及纤维化基因表达
    3.8 Western-Blot检测TGF-β1 刺激LV-GFP、LV-SIRT6 及空白处理control组三组的相关纤维化因子的表达
    3.9 QPCR检测TGF-β1 刺激LV-GFP、LV-SIRT6 及空白处理control组三组的相关纤维化因子的表达
    3.10 对差异基因进行富集分析
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    References



本文编号：4002756