【摘要】：目的急性肺损伤（ALI）以失控性炎症反应、通透性肺水肿、肺泡内液体聚集及呼吸衰竭为病理生理特征。血管紧张素II（Ang II）是肾素-血管紧张素系统（RAS）的主要效应物，具有维持体内水盐平衡和细胞外液容量的生理作用。Ang II在ALI失控性炎症反应中扮演重要作用，，但是在ALI肺水肿形成及肺泡内液体聚集中作用尚未阐明。肺泡上皮钠通道（ENaC）是肺泡内钠水重吸收的关键限速步骤，调控肺泡内液体容量平衡。来源于肾及结肠等多个组织器官的研究均提示Ang II能调控ENaC表达及功能活性，尚不清楚Ang II在肺组织中对ENaC的作用。故本研究通过气道内滴入脂多糖诱导ALI动物模型及微量泵泵入不同浓度Ang II两种方式，探讨内源性生成及外源性给予AngII对肺泡液体清除（AFC）及肺泡上皮钠通道（ENaC）表达的影响，并用A549细胞进一步证实Ang II对ENaC的表达调控作用。 方法内源性Ang II实验部分：SD大鼠用戊巴比妥腹腔注射麻醉后，行气管插管，通过气管导管向气管内注入LPS（1mg/kg）诱导ALI。空白对照组大鼠则给予等量的生理盐水。血管紧张素II1型（AT1）受体阻滞剂ZD7155（10mg/kg）在LPS滴入前30min于腹腔内注入。SD大鼠均杀死后抽取血液及取出完整肺组织，右肺用于AFC测量，左肺用于测量肺组织水含量及支气管肺泡灌洗液分析，并采用HE染色观察病理改变，用免疫组织化学分析ENaC在肺组织内的表达变化。用ELISA方法分析肺组织和血浆中内Ang II浓度。肺组织内的ENaC蛋白表达用蛋白免疫印迹法（Western blotting）测定。外源性Ang II实验部分：SD大鼠以戊巴比妥腹腔注射麻醉后，行颈静脉置管术，通过微量泵泵入不同浓度（1，10及100μg/kg·min）的外源性Ang II。空白对照组大鼠则泵入等量的生理盐水。血管紧张素II1型（AT1）受体阻滞剂ZD7155（10mg/kg）及cAMP降解抑制剂罗利普兰（1mg/kg）在Ang II泵入前30min于腹腔内注入。SD大鼠均杀死后抽取血液及取出完整肺组织，右肺用于AFC测量，左肺用于测量肺组织水含量及支气管肺泡灌洗液分析，并采用HE染色观察病理改变，用免疫组织化学分析ENaC在肺组织内的表达变化。用ELISA方法分析肺组织中TNF-α、IL-β浓度。采用RIA法测定肺组织内环磷酸腺苷（cAMP）水平。肺组织内的ENaC mRNA及蛋白表达分别用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）测定。并进一步给予A549细胞含有不同浓度（10-7M，10-5M）的Ang II培养基培养，用Western blotting分析不同浓度Ang II对A549细胞ENaC蛋白表达的作用。 结果内源性Ang II研究中：气道内滴入LPS诱导肺组织及血浆中Ang II水平显著升高，并伴随AFC降低。LPS的作用时间与Ang II升高和AFC的降低程度相关(血浆：ALI2h组2.53±0.4μg/l，ALI4h组3.78±1.15μg/l，ALI6h组4.91±1.1μg/l；肺组织：ALI2h组190.2±38.23μg/l，ALI4h组305±72.99μg/l，ALI6h组580.4±129.16μg/l)。预先给予ZD7155作用后，能显著抑制ALI诱导的AFC降低作用(7.8±1.61%vs4.4±1.14%)，同时逆转ALI诱导的对β及γ-ENaC蛋白表达的下调作用，但却进一步下调α-ENaC蛋白表达(P0.05)。ZD7155还显著改善ALI诱导的间质水肿及炎症细胞浸润的病理改变。外源性AngII研究中：给予外源性高浓度（10及100μg/kg·min）Ang II显著抑制AFC并呈剂量依赖效应(P0.05)。Ang II泵入导致对α-ENaC和β及γ-ENaC表达的非协同调节作用，上调α-ENaC和下调β及γ-ENaC表达。给予ZD7155干预后，能显著拮抗外源性Ang II对AFC(10.8±1.483%vs6.2±2.683%)及ENaC表达的调控作用(P0.05)。在A549细胞研究中，也显示Ang II对ENaC表达的非协同调节作用，并呈浓度依赖的方式调控ENaC表达(P0.05)。外源性Ang II显著抑制肺组织内cAMP水平，给予罗利普兰后则缓解Ang II对AFC的抑制作用(9.8±3.033%vs6.2±2.683%)。 结论内外源性Ang II都能够通过激活AT1受体抑制肺泡液体清除，导致肺水含量增加，诱导肺水肿形成。 Ang II对ENaC三个亚基的表达呈非协同的调节作用，可能导致了ENaC中HSC与NSC通道比例的失调，从而影响了肺泡内液体的清除。 AT1受体阻滞剂及cAMP降解抑制均能够对Ang II诱导的肺泡液体清除降低具有保护作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R563.8
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本文编号：
2320703
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