TRB3表达变化通过Smad依赖信号通路对小鼠肺纤维化的影响

发布时间：2018-11-26 16:02

【摘要】：研究目的1、明确博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠及体外II型肺泡上皮细胞(MLE-12)EMT模型中Tribbles Homologue 3(TRB3)的表达及Smad信号通路的活化情况。2、探讨TRB3过表达及低表达时对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响及体外对TGF-β刺激的MLE-12细胞EMT的影响。3、探讨TRB3过表达及低表达对肺纤维化体内及体外模型中Smad信号通路的影响,初步揭示TRB3表达变化通过Smad依赖信号通路对肺纤维化的影响。研究方法1、构建带有绿色荧光蛋白(Greenfluorescenceprotein,GFP)示踪基因的Ad-TRB3,Ad-TRB3-sh RNA载体,并进行鉴定及扩增。2、实验分组处理1)细胞实验中将MLE-12细胞分为8组,未进行TGFβ刺激组:空白对照组,Ad-GFP感染组,Ad-TRB3感染组,Ad-sh RNA-TRB3感染组;进行TGFβ刺激组:TGFβ1组,TGFβ1+Ad-GFP感染组,TGFβ1+Ad-TRB3感染组,TGFβ1+Ad-sh RNA-TRB3感染组。2)动物实验中将C57BL/6小鼠分为5组:单纯对照组+生理盐水,纤维化模型组+生理盐水,纤维化+Ad-GFP组,纤维化+Ad-TRB3组,纤维化+Ad-TRB3-sh RNA组,采用博莱霉素气管内滴注的方法建立肺纤维化模型,分别于D7、D14和D28时间点处死实验大鼠一批,收集BALF、肺组织标本供实验用。3、CCK-8法及流式细胞术检测MLE-12细胞的增殖率、凋亡率。4、HE染色、Masson染色、羟脯氨酸测定、Ashcroft纤维化评分及肺泡灌洗液细胞分类及计数研究博莱霉素诱导的小鼠不同时间段肺部炎症及纤维化程度。5、PCR检测各组TRB3、α-SMA、Colla I m RNA的表达。6、Western blot检测各组TRB3、α-SMA、E-cadherin、Vimentin,p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达。7、ELISA检测Colla I的表达。研究结果1、博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠及体外TGF-β刺激诱导MLE-12细胞EMT模型中TRB3 m RNA及蛋白含量均升高。2、博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠及体外TGF-β刺激诱导MLE-12细胞EMT模型中p-Smad2、p-Smad3蛋白均升高;TRB3过表达促进了p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达,TRB3低表达降低了p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达。3、TRB3过表达促进了博莱霉素诱导的小鼠及体外MLE-12细胞EMT的发生:E-cadherin表达降低,α-SMA、Colla I m RNA及α-SMA、Vimentin、Colla I蛋白表达均升高,TRB3低表达则作用相反。4、TRB3过表达促进了博莱霉素诱导的小鼠发生肺纤维化,TRB3低表达减弱了博莱霉素诱导的小鼠发生肺纤维化。5、(1)未进行TGF-β刺激的MLE-12细胞,TRB3过表达时促进了细胞的凋亡,抑制了其增殖,TRB3低表达时促进了MLE-12细胞增殖,抑制了其凋亡;(2)TGF-β刺激MLE-12细胞后,细胞增殖受抑制,凋亡增加,说明TGF-β诱导MLE-12细胞发生凋亡;(3)TRB3过表达促进了TGF-β对MLE-12细胞凋亡的诱导及对细胞增殖的抑制,TRB3低表达则抑制了TGF-β对MLE-12细胞凋亡的诱导,促进了细胞的增殖。研究结论1、博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠及体外MLE-12细胞EMT模型中表达TRB3。2、博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠及体外MLE-12细胞EMT模型中Smad信号通路得到活化。3、TRB3表达可能通过Smad依赖的信号通路影响博莱霉素诱导的小鼠及体外MLE-12细胞EMT的发生,进而影响肺纤维的形成与发展。4、TRB3表达可能通过促进细胞的凋亡影响EMT及肺纤维化的发生。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R563

【参考文献】

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本文编号：2359009