茶碱对烟草烟雾暴露下单核细胞糖皮质激素抵抗的作用及机制探讨

发布时间：2018-12-13 02:33

【摘要】：第一部分茶碱对烟草烟雾暴露下人单核细胞分泌IL-8的影响 目的观察烟草烟雾暴露下能否造成人单核细胞糖皮质激素抵抗；茶碱能否减轻烟雾暴露下人单核细胞糖皮质激素抵抗。 方法以人淋巴瘤单核细胞株U937为研究对象，用香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract CSE）制造细胞烟草烟雾暴露氧化应激模型。分为茶碱+CSE组、CSE组、对照组。各组细胞在肿瘤坏死因子（Tumor necrosisfactor-α TNF-α）（10ng/L）干预下，观察7个不同浓度的地塞米松对各组细胞IL-8分泌的影响。 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)检测白细胞介素-8(Interleukin-8IL-8)，应用Microsoft Excel2003计算不同浓度地塞米松对U937细胞分泌IL-8的抑制率及地塞米松对IL-8分泌的半数抑制浓度（dexamethasone half inhibitory concentration，IC50-Dex）。 结果IL-8抑制率及IC50-Dex：茶碱+CSE组IL-8抑制率低于对照组但高于CSE组，茶碱+CSE组IC50-Dex高于对照组但低于CSE组（P0.05）。烟草烟雾暴露可使细胞IL-8的分泌量增多；茶碱干预后可使细胞IL-8的分泌量明显减少。 结论1.烟草烟雾暴露能使人单核细胞对糖皮质激素的敏感性下降，造成糖皮质激素抵抗。2.茶碱能减轻烟草烟雾暴露下人单核细胞糖皮质激素抵抗，增加糖皮质激素抗炎作用。 第二部分茶碱对烟草烟雾暴露下人单核细胞HDAC2表达及PI3K-δ/Akt传导通路的影响 目的探讨茶碱是否通过抑制烟草烟雾暴露对PI3K-δ/AKT通路的激活使HDAC2的表达上调从而减轻烟草烟雾暴露下人单核细胞的糖皮质激素抵抗。 方法以人淋巴瘤单核细胞株U937为研究对象，用CSE制造细胞烟草烟雾暴露氧化应激模型及转染HDAC2-siRNA干扰细胞HDAC2的表达。分为(1)茶碱+CSE组、CSE组、对照组。（2）HDAC2-siRNA组、HDAC2-siRNA+茶碱组、SC组,对照组。（3）茶碱+CSE组、IC87114+CSE组、CSE组、对照组。 其中（2）、（3）在肿瘤坏死因子TNF-α（10ng/L）干预下，观察7个不同浓度的地塞米松对各组细胞IL-8分泌的影响。 应用ELISA检测IL-8，应用Microsoft Excel2003计算不同浓度地塞米松对U937细胞分泌IL-8的抑制率及地塞米松对IL-8分泌的IC50-Dex。 应用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative polymerasechain reaction RT-PCR)检测各组U937细胞组蛋白去乙酰化酶I（IHistonedeacetylase2HDAC2）mRNA的表达水平。 应用蛋白印迹法（Western blotting WB）检测各组U937细胞磷脂酰激醇3-激酶（Phosphoinositide-3-kinase PI3K）蛋白、磷酸化细胞蛋白激酶B （Phosphorylase-Protein Kinase B P-Akt）、蛋白激酶B（Protein KinaseB AKT）蛋白及HDAC2蛋白的表达水平。 应用免疫荧光法检测各组U937细胞PI3K蛋白表达，应用免疫组化法检测各组U937细胞AKT、P-AKT蛋白表达。 结果1.IL-8抑制率及IC50-Dex：（1）HDAC2-siRNA+茶碱组IL-8抑制率低于SC组和对照组但高于HDAC2-siRNA组，HDAC2-siRNA+茶碱组IC50-Dex高于SC组和对照组但低于HDAC2-siRNA组（P0.05）。（2）IC87114+CSE组IL-8抑制率低于对照组但高于CSE组，IC87114+CSE组IC50-Dex高于对照组但低于CSE组（P0.05）。IC87114+CSE组与茶碱+CSE组相比，，IL-8抑制率及IC50-Dex差别均无统计学意义（P0.05）。沉默细胞HDAC2后可增加IL-8的分泌量；用茶碱或选择性PI3K-δ抑制剂IC87114干预后均可使细胞IL-8的分泌量明显减少。 2.HDAC2mRNA表达：（1）茶碱+CSE组HDAC2mRNA表达水平高于CSE组而低于对照组（P0.05）。（2）HDAC2-siRNA+茶碱组的HDAC2mRNA表达水平高于HDAC2-siRNA组但低于SC组和对照组（P0.05）。烟草烟雾暴露可使细胞HDAC2的基因表达降低；使用HDAC2-siRNA沉默细胞内HDAC2后也使细胞HDAC2的基因表达降低；茶碱或IC87114干预后均可使细胞HDAC2的基因表达明显增高。 3.PI3K蛋白、P-Akt蛋白、AKT蛋白及HDAC2蛋白表达：(1)各组PI3K蛋白表达水平差别无统计学意义（P0.05）。(2)各组AKT蛋白表达水平差别无统计学意义（P0.05）。（3）茶碱+CSE组P-Akt蛋白表达水平低于CSE组但高于对照组（P0.05）。（4）IC87114+CSE组P-Akt蛋白表达水平低于CSE组但高于对照组（P0.05）；IC87114+CSE组P-Akt蛋白表达水平与茶碱+CSE组相比差别无统计学意义（P0.05）。（5）茶碱+CSE组HDAC2表达水平高于CSE组而低于对照组（P0.05）。（6）HDAC2-siRNA+茶碱组的HDAC2蛋白表达水平高于HDAC2-siRNA组但低于SC组和对照组（P0.05）。（7）IC87114+CSE组HDAC2表达水平高于CSE组而低于对照组（P0.05）；IC87114+CSE组HDAC2蛋白表达水平与茶碱+CSE组相比差别无统计学意义（P0.05）。烟草烟雾暴露可使细胞P-AKT蛋白表达增高，用茶碱或IC87114干预后可显著降低P-AKT蛋白表达水平。烟草烟雾暴露及使用HDAC2-siRNA沉默HDAC2后细胞HDAC2的蛋白表达均降低；茶碱或IC87114干预后细胞内HDAC2的蛋白表达均增高。 结论烟草烟雾暴露能激活PI3K/AKT通路使HDAC2表达减少从而造成糖皮质激素激素抵抗；茶碱及选择性PI3K-δ抑制剂IC87114能通过抑制烟草烟雾暴露对PI3K/AKT通路的激活使HDAC2的表达上调从而减轻烟草烟雾暴露下人单核细胞的糖皮质激素抵抗。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R563.9

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本文编号：2375716