转染miR-146a对肺泡巨噬细胞中核因子-κB表达的影响

发布时间：2019-08-01 10:37

【摘要】：目的观察肺泡巨噬细胞转染miR-146a后细胞浆与细胞核内核因子-κB(NF-κB)表达的变化,探讨miR-146a调控肺泡巨噬细胞炎症反应的可能机制。方法将NR8383大鼠肺泡巨噬细胞分成两组:一组为转染组,转染50 nmol/L Pre-miRTMmiR-146a Precursors;另一组为对照组,转染50 nmol CyTM3-labeled PremiRTMNegative Control。两组细胞转染24 h后加入含脂多糖培养基(终浓度1μg/mL),培养6 h后收集细胞,分别提取细胞浆蛋白与细胞核蛋白,采用Western blot方法检测NF-κB p65蛋白的表达。结果转染组miR-146a表达较对照组上调(P0.01)。转染组细胞浆内NF-κB p65蛋白表达较对照组上调(P0.05),而细胞核内NF-κB p65蛋白表达较对照组下调(P0.05)。结论肺泡巨噬细胞转染miR-146a可抑制NF-κB核转位,推测miR-146a通过此机制减轻肺泡巨噬细胞炎症反应。
【图文】：

际?常规SDS－PAGE凝胶电泳、转膜、免疫学处理及曝光。分别选取β－actin和LaminB1作为内参，检测细胞浆、细胞核内NF－κBp65蛋白的表达。1．6统计学方法采用SPSS17.0统计软件，组间比较采用两独立样本t检验。2结果2．1CyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl的转染效率25nmol/LCyTM3－labeledPre－miＲTMNega-tiveControl的转染效率约为70%，50nmol/L的转染效率约为80%，100nmol/L的转染效率约为50%。结果表明50nmol/LCyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl转染细胞效率较高。见图1。图1不同浓度CyTM3－labeledPre－miＲTMNegativeControl的转染情况(×400)2．2两组细胞miＲ－146a表达比较设对照组细胞miＲ－146a的表达量为1.00±0.00，则转染组细胞miＲ－146a的表达量为24.55±6.14，与对照组比较，转染组miＲ－146a表达明显上调(P＜0.01)。2．3两组细胞NF－κBp65蛋白含量比较转染组细胞浆内NF－κBp65蛋白表达较对照组上调(P＜0.05)，而细胞核内NF－κBp65蛋白表达较对照组下调(P＜0.05)，见图2、表1。3讨论肺泡巨噬细胞介导的固有免疫反应在AＲDS发病机制中发挥着关键作用［6］。肺泡巨噬细胞受到机械损伤、病原微生物或炎症因子刺激时，激活细胞膜上的Toll样受体(TLＲ)，然后通过一系列信号转导，激活NF－κB向细胞核内转位，诱导大量炎症因子和炎症通路信号蛋白的转录表达，失控性释放大量炎症因子，促进炎症的级联放大，形成肺内炎症“瀑布”反应［7－8］。活化·2815·广东医学2014年9月第35卷第18期GuangdongMedicalJournalSep．2014，，Vol．35，No．18

图2两组细胞NF－κBp65蛋白的表达表1两组细胞NF－κBp65蛋白表达比较xs

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