雷公藤甲素对急性肺损伤大鼠肺内ABCA1表达的影响

发布时间：2017-03-17 15:00

  本文关键词：雷公藤甲素对急性肺损伤大鼠肺内ABCA1表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分LPS诱导大鼠急性肺损伤动物模型的建立 目的评估脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱导的大鼠急性肺损伤动物模型可靠性。 方法：30只雄性SD大鼠，体重200~250g，随机分为2组：对照组(C组，n=15)；模型组(M组，n=15)。C组和M组分别经尾静脉注射同等容量的生理盐水或LPS5mg/kg。各组分别于建模前1h和建模后3、6、12h抽取动脉血气；建模后12h处死大鼠，留取右肺下叶，石蜡切片，HE染色，光镜下观察肺组织病理改变；计算大鼠右肺中叶湿/干重(W/D)比。 结果肺脏病理形态学观察和常规光镜检查：肺脏大体观察示C组大鼠肺组织形态大小正常，呈粉红色，表面光滑，切面可见组织细腻，无渗出、充血等明显异常改变。M组肺体积明显增大，肺表面色泽暗红，可见包膜下散在出血点、出血斑及斑片状略凹陷的肺萎陷区，切面疏松，有黄色或淡红色液体溢出。HE染色后，C组光镜下肺组织结构完整，肺泡结构清晰，肺泡腔完整,壁光滑,肺泡间隔均匀一致,可见少量白细胞,肺泡腔中无渗出液或渗出的白细胞；M组大鼠光镜下大量炎性细胞浸润，毛细血管明显扩张、充血，白细胞附壁，肺泡隔明显增宽，肺泡壁完整结构破坏，肺泡壁断裂，部分肺泡内见出血及微血栓形成，大量白细胞渗出、聚集,肺泡腔中可见渗出液、红细胞、多形核中性粒细胞、巨噬细胞，部分肺泡腔萎陷不张。与C组相比，M组肺毛细血管充血、中性粒细胞渗出及肺泡间隔增宽程度明显加剧(P0.05)，且M组右肺中叶W/D比值明显增加(P0.05)。在动脉血氧分压(PaO2)变化上，M组PaO2随时间延长下降明显。与C组同时间段相比，M组建模后3、6、12h PaO2均下降明显(P0.05)；与同组基础值相比，M组建模后12h PaO2下降46.01%。与C组相比。M组大鼠肺部病理改变，PaO2下降符合急性肺损伤动物模型标准。从病理角度看M组有80.0%的大鼠出现肺损伤变化，而C组只有20%的大鼠出现一定的病理变化。 结论以LPS5mg/kg尾静脉注射可成功建立大鼠急性肺损伤模型。 第二部分雷公藤甲素对急性肺损伤大鼠肺内ABCA1表达的影响 目的探讨急性肺损伤大鼠肺内ABCA1(ATP-binding cassette transporter A1)基因、蛋白的表达及意义；以及雷公藤甲素对急性肺损伤大鼠肺内ABCA1基因、蛋白表达调节的影响，以探讨其肺保护作用的可能机制。 方法30只雄性SD大鼠，体重200~250g，随机分为6组：①正常组(N组，n=5)，，不作任何处理；②对照组(C组，n=5)，经尾静脉注射生理盐水，同时腹腔注射1%二甲基亚砜(DMSO)；③LPS组(L组，n=5)，经尾静脉注射LPS5mg/kg，同时腹腔注射1%DMSO；④雷公藤甲素25μg组(TP1组，n=5)，经尾静脉注射LPS5mg/kg，同时腹腔注射雷公藤甲素25μg/kg；⑤雷公藤甲素50μg组(TP2组，n=5)，经尾静脉注射LPS5mg/kg，同时腹腔注射雷公藤甲素50μg/kg；⑥雷公藤甲素100μg组(TP3组，n=5)，经尾静脉注射LPS5mg/kg，同时腹腔注射雷公藤甲素100μg/kg。观察12h后处死大鼠，取新鲜肺组织，用荧光定量PCR测定ABCA1mRNA的表达；应用westernblot分析ABCA1蛋白表达。用ELISA法检测血清、左肺肺泡灌洗液TNF-α水平；留取右肺下叶，石蜡切片，HE染色，光镜下观察肺组织病理，按照改良弥漫性肺泡损伤(improved evaluation of diffuse alveolar damage score，IDAD)标准进行评分；测量大鼠右肺中叶W/D；各组于注射前1h和注射后1、3、6、12h抽取动脉血行血气分析。 结果1、各组大鼠肺病理改变、IDAD评分及W/D比值：N、C组大鼠光镜下肺组织结构正常, IDAD评分及W/D比值，两组间比较无统计学差异(P0.05)； L组大鼠可见肺泡间隔明显增宽、肺泡陷闭、肺泡腔内渗出等，与N、C组比较，IDAD评分及W/D比值均升高且有统计学意义(P0.05)；TP1组大鼠亦可见肺泡间隔增宽、肺泡陷闭、肺泡腔内渗出等， IDAD评分、右肺中叶W/D比值高于N、C组有统计学意义(P0.05)，与L组相比无统计学意义(P0.05)；TP2组肺泡结构基本正常，间质有水肿，部分可见毛细血管扩张、充血和炎性细胞浸润，IDAD评分虽高于N、C组(P0.05)，但较L组明显改善(P0.05)，右肺中叶W/D比值亦小于L组(P0.05)；TP3组可见肺泡间隔稍增宽、部分肺泡陷闭、间质有水肿、部分可见毛细血管扩张、充血和炎性细胞浸润等，但IDAD评分、右肺中叶W/D比值均低于L组(P0.05)，与TP2组相比，无统计学意义(P0.05)。 2、动脉血气分析：L组、TP1组注射后3、6、PaO2下降，且与N、C组相比有统计学意义(P0.05)；TP2组、TP3组注射后3、6、12h PaO2亦下降，与N、C组相比有统计学意义(P0.05)，但较L组、TP各组同时间段PaO2高且有统计学意义(P0.05)。 3、血清和BALF中TNF-α表达变化：注射后12h血清和BALF中TNF-α表达，L组、TP1组明显升高且与N、C组相比有统计学意义(P 0.05)；TP2组、TP3组相应表达均低于L组、TP1组(P0.05)；但同时TP3组与N、C组相比也降低(P0.05)； 4、ABCA1mRNA和蛋白表达的变化：TP各组随着雷公藤甲素剂量的增加，ABCA1mRNA和ABCA1蛋白的表达呈现升高趋势，与L组比较，TP2、TP3组ABCA1mRNA和ABCA1蛋白水平明显升高(P0.05)，但TP3组与TP2组相比没有统计学意义(P0.05)。 结论 1、LPS致急性肺损伤大鼠肺内ABCA1基因、蛋白表达较对照组减少。 2、雷公藤甲素能降低LPS致急性肺损伤大鼠炎性因子表达，改善氧合，减轻肺的病理损害，发挥肺保护作用。 3、雷公藤甲素能促进ABCA1基因、蛋白表达，抑制炎症因子的分泌。据此，我们有理由推测对ABCA1基因、蛋白表达的调节是雷公藤甲素肺保护作用的可能机制之一。 4、雷公藤甲素对ABCA1基因、蛋白表达的调节在25～100μg/kg范围内呈一定的剂量依赖性。
【关键词】：急性肺损伤(ALI) 脂多糖(LPS) ABCA1
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R614;R563.9
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-14
• 第一部分 LPS 诱导大鼠急性肺损伤动物模型的建立14-24
• 实验材料14-15
• 实验方法15-17
• 结果17-22
• 讨论22-24
• 第二部分 雷公藤甲素对急性肺损伤大鼠肺内 ABCA1 表达的影响24-40
• 实验材料24-26
• 实验方法26-30
• 结果30-37
• 讨论37-40
• 参考文献40-45
• 综述一45-57
• 参考文献51-57
• 综述二57-65
• 参考文献62-65
• 中英文缩略词表65-66
• 攻读学位期间公开发表的论文66-67
• 致谢67-68

【参考文献】

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本文编号：253014