多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节作用的研究

发布时间：2019-10-17 12:39

【摘要】：目的: 研究NCI-H292细胞在多聚左旋精氨酸（Poly-L-arginine）联合脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）作用于下白介素-6（interleukin-6,IL-6）、IL-8、IL-13、嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达水平，以及肝素和L-单甲基-精氨酸（L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA）对其细胞因子表达的影响。方法: 1.细胞培养及哮喘微环境模型的建立将NCI-H292细胞培养在含10%胎牛血清的常规培养基中，每周传代两次；选择生长状态良好的细胞以3×105/500μl密度接种于24孔培养板中，用LPS预先将气道上皮细胞激活，模拟哮喘气道上皮细胞模型。 2.细胞因子水平的测定按照实验设计分为空白对照组(培养液)、LPS组(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸组(Max=40μg/ml)、LPS+poly-L-arginine组、LPS+poly-L-arginine+肝素(100u/L)组、LPS+poly-L-arginine+L-NMMA(Max=0.8mM)组，并依照分组要求加入不同浓度的多聚左旋精氨酸、LPS、肝素、L-NMMA；共培养20小时，，收集细胞上清液。按照试剂盒说明采用ELISA法检测各组IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的表达水平，并比较各组间的差异。 3.统计学处理实验数据采用SPSS16.0统计分析软件分析，数据以x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析（one-wayANOVA）；两两比较时方差齐时采用LSD检验，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验。P0.05为差异有统计学意义。结果: 1.在多聚左旋精氨酸作用下，IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平明显增高，且在多聚左旋精氨酸为5μg/ml时，IL-6、IL8的表达水平最高；在多聚左旋精氨酸为20μg/ml时，Eotaxin的表达水平最高；但各浓度之间的差异无统计学意义；而单独LPS组、多聚左旋精氨酸组与对照组比较，IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差异无统计学意义(P0.05)。 2.在多聚左旋精氨酸作用下，IL-13的表达未见明显改变；各组IL-13的水平差异无统计学意义(P0.05)。 3.将多聚左旋精氨酸、LPS及肝素共同作用NCI-H292细胞时，IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平明显低于LPS+poly-L-arginine组(P0.05)。 4.将多聚左旋精氨酸、LPS及L-NMMA共同作用NCI-H292细胞时，L-NMMA对各组IL-6、IL-8的表达无影响(P0.05)。结论: 1.多聚左旋精氨酸能够促进LPS诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8、Eotaxin的表达水平，但对IL-13的表达水平没有影响。 2.肝素能够抑制多聚左旋精氨酸联合LPS诱导的NCI-H292细胞IL-6、IL-8的表达水平，而L-NMMA对IL-6、IL-8的表达水平没有影响。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R562.25

【参考文献】