在LPS诱导急性肺损伤中WNT5a非经典通路通过NANCI调控Nkx2.1的机制研究

发布时间：2020-03-24 20:02

【摘要】：目的:长链非编码RNA((lncRNA)作为调控基因可参与调控多种生理过程,NANCI属于基因间lncRNA,主要表达于发育中的肺、甲状腺和腹侧前脑组织内,其表达模式与Nkx2.1相似。Nkx2.1可参与肺发育的生理过程,并对维持肺组织的正常形态起着重要作用,Nkx2.1作为重要的转录因子受多种通路调控,包括Wnt通路,其中Wnt5a属于Wnt蛋白家族非经典通路蛋白,对稳定肺泡结构形态和促进肺泡上皮细胞转分化起重要的调控作用。急性肺损伤(ALI)是各种因素导致的急性低氧性呼吸功能不全,具有较高的病死率,其病理改变主要是由于肺泡和毛细血管受到损伤,导致的顽固性低氧血症和非心源性肺水肿,病理上可表现出肺间质增厚、肺泡建构紊乱。那么Wnt5a、NANCI和Nkx2.1三者在ALI病理情况下是否存在联系,且它们之间是通过何种机制进行相互调控的。方法:将80只4到6周小鼠随机分成模型组和对照组,通过向小鼠气管内滴入LPS构建急性肺损伤模型,并在给药后3h、6h、12h、24h和48h收集肺组织,通过显微镜观察肺组织形态改变,通过PCR、免疫荧光双染及免疫印迹检测Wnt5a、Nkx2.1、SPC和AQP5的表达水平,通过PCR检测NANCI表达。在细胞水平,通过慢病毒构建Wnt5a或NANCI低表达的细胞系,收集细胞通过PCR、免疫荧光以及免疫印迹检测相关基因的转录与翻译情况,收集培养基通过ELISA检测分泌到培养基内的Wnt5a的表达水平。结果:在体内实验中,与对照组相比,模型组从6h后其组织形态逐渐出现改变,在6h时出现肺间质增厚,而后出现肺泡结构改变。与对照组相比,模型组的NANCI、Nkx2.1、SPC和AQP5表达水平无论基因水平还是蛋白水平均下降(p0.05),并且不同时间点其表达水平不完全一致,Wnt5a在基因水平转录受到抑制(p0.05),但在3h、24h和48h时其蛋白水平上有一个轻度的上调趋势(p0.05)。在体外实验中,当NANCI表达受到抑制时(p0.05),Nkx2.1和SPC表达均受到明显抑制(p0.05),Wnt5a在mRNA和蛋白水平均表现出上调趋势(p0.05)。而当Wnt5a表达受到抑制时(p0.05),NANCI、Nkx2.1以及SPC均下调(p0.05)。结论:Wnt5a、NANCI和Nkx2.1均参与急性肺损伤,尤其是肺泡损伤的致病过程,且NANCI通过调控Nkx2.1的表达参与急性肺损伤的病理过程,且其表达受Wnt5a的调控,与Wnt5a之间存在反馈调控。
【图文】：

肺组织形态学肺组织HE染色，模型组与对照组相比肺间质增厚，肺泡结构异常，标尺为100μm

5 广泛表达于细胞浆内。与对照组相比，模型组的 Nkx2.1、SPC、AQP5 荧光丰度减弱、表达范围减小且趋势相一致（图2.1A.B），Wnt5a 变化不明显（图 2.2A.B）。3.3 PCR 测定组织内 Wnt5a、NANCI、Nkx2.1、SPC 和 AQP5 的表达与对照组相比，模型组的 SPC（图 3A）和 AQP5（图 3B） mRNA 水平表达呈下降趋势，SPC 从 6h 开始下降（p<0.01），在 24h 达到下降最明显（p<0.01），且 6h以后模型组与 3h 相比均明显下降（p<0.01）；AQP5 在 6h 时下降最明显（p<0.01），随后模型组的下降趋势虽不如 6h 时明显，，但与同时间点的对照组及 3h 模型组相比明显下降（p<0.05）。与对照组相比
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R563

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本文编号：2598791