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LncMALAT1对转化生长因子-β1诱导人肺成纤维细胞增殖分化的影响

发布时间:2020-03-24 22:48
【摘要】:背景和目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是最为常见的特发性间质性肺炎,其预后比多数肺癌差,中位生存期从确诊之日起为2-5年,5年生存率仅为20%,其最近几十年来发病率一直在上升,目前还没有治愈的方法。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)是一种表达较为普遍的lncRNA,可以促进多种肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程,并且可以参与肝脏纤维化进展过程,然而,目前尚未见到有关lncRNA MALAT1在IPF中的作用的相关研究,肺成纤维细胞增殖及向肌成纤维细胞分化是影响IPF发生的关键过程之一,为此,本研究就lncRNA MALAT1在人肺成纤维细胞增殖分化中的作用展开了研究。材料与方法培养人肺成纤维细胞HFL-1,应用二苯基四氮唑溴盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测不同浓度转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用不同时间对HFL-1细胞增殖的影响,确定TGF-β1最佳作用浓度和时间;在以上实验的基础上,采用5ug/L TGF-β1作用于HFL-1细胞48h,将其定义为药物组,未进行任何处理的细胞定义为对照组,实时荧光定量核酸扩增检测(real-time quantitative PCR detecting system,qPCR)技术检测两组lncMALAT1表达水平;将细胞分为空白对照组TGF-β1组阴性转染组和siMALAT1组:空白对照组不做任何处理,TGF-β1组采用5ug/L的TGF-β1处理,阴性转染组采用TGF-β1和siMALAT1 NC共处理,siMALAT1组采用TGF-β1和siMALAT1共处理,qPCR检测不同组别α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle activation protein,α-SMA)Ⅰ型胶原(collagen1,COL1)mRNA及lncMALAT1的表达水平;Western-blot法检测以上四组α-SMACOL1蛋白的表达情况;MTT法检测四组HFL-1细胞的增殖情况。结果(1)在244872h,不同浓度TGF-β1刺激时HFL-1细胞的增殖均呈现出先增后减的趋势(P0.05);TGF-β1作用48h时,不同浓度组别间细胞增殖活力有差异(P0.05);5ug/LTGF-β1作用48h为最适药物作用浓度和时间。(2)药物组lncMALAT1相对表达量高于对照组(P0.05)。(3)四组α-SMACOL1mRNA及lncMALA的相对表达量具有统计学差异(P0.05);TGF-β1组阴性转染组上述RNA相对表达量均高于空白对照组和siMALAT1组(P0.05),阴性转染组各RNA相对表达量同TGF-β1组相比无差异(P0.05)。(4)四组α-SMACOL1蛋白的相对表达量具有统计学差异(P0.05);TGF-β1组阴性转染组蛋白相对表达量均高于空白对照组和siMALAT1组(P0.05),阴性转染组和TGF-β1组相比无差异(P0.05)。(5)四组HFL-1细胞增殖活力有统计学差异(P0.05);TGF-β1组阴性转染组细胞增殖活力高于空白对照组和siMALAT1组(P0.05),阴性转染组同TGF-β1组相比无差异(P0.05)。结论(1)lncMALAT1在TGF-β1刺激HFL-1细胞后表达水平升高。(2)lncMALAT1基因沉默后,经TGF-β1诱导活化的人肺成纤维细胞中α-SMACOL1的mRNA和蛋白表达水平下降。(3)lncMALAT1基因沉默可以抑制人肺成纤维细胞的增殖活力。(4)深入探索lncMALAT1的作用机制及其影响的分子通路并进行靶向调控可能为IPF的治疗提供新的治疗手段。
【图文】:

相组,蛋白表达,蛋白,情况


P=0.054),,详见图 5,图 6图 5 不同组别 α-SMACOL1 蛋白相组和 siMALAT1 组比较 P<0.05****ontrol group TGF-β1 group negativetransfection gOL1 α-SMA
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R563

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