SIGIRR在LPS诱导的人肺泡II型上皮细胞（A549）急性炎症反应中的作用
发布时间：2020-03-25 18:45
【摘要】： 【课题研究的目的与意义】在急性肺损伤（ALI）以及其他多种肺部急性炎性疾病的致病机理中，LPS-TLR4信号通路被认为起着核心作用，因此抑制这一信号通路对减轻ALI有着重要意义。目前发现的可抑制TLR4的分子中，单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)是其中一员。其可通过与TLR4结合作用从而抑制LPS信号。由于既往研究未阐明SIGIRR是否表达于人肺泡上皮细胞，故本研究从检测SIGIRR在人正常肺泡上皮细胞中的表达开始，，探讨SIGIRR在肺泡上皮细胞急性炎症反应中的作用。【方法】采用免疫组化、RT-PCR及Western blot的方法，从组织、蛋白及mRNA三个水平分别检测了人正常肺组织以及肺泡II型上皮细胞来源的永生肺腺癌细胞系A549中SIGIRR的表达情况。选用LPS作为刺激因素，采用实时定量PCR及定量Western blot检测A549细胞中SIGIRR mRNA及蛋白表达水平的动态变化。构建含SIGIRR全长cDNA的真核表达载体并转染A549细胞使其过表达SIGIRR，采用双萤光素酶报告系统研究SIGIRR对LPS导致的NF-kB激活的影响，经过ELISA法研究SIGIRR在A549细胞中对LPS引起的细胞因子生成的影响，通过MTT检测了SIGIRR过表达后LPS刺激下A549细胞的生长与存活情况。【结果】经免疫组化染色检测，20例肺组织标本中肺泡上皮细胞均有SIGIRR表达；经RT-PCR检测，20例肺组织标本及A549细胞均在433bp处可见条带；Western blot检测到SIGIRR蛋白表达于正常肺组织及A549细胞，A549细胞中SIGIRR蛋白的分子量大小与正常肺组织中相同。通过实时定量PCR发现在LPS刺激后3 h, 6 h及12h，SIGIRR mRNA水平较刺激前显著降低；但是刺激后24h，SIGIRR mRNA又恢复至刺激前水平；通过定量Western blot分析发现刺激前与刺激后3h、6h、12h之间SIGIRR蛋白表达水平无统计学差异，刺激后24h，蛋白表达显著低于前几个时间点。A549细胞过表达SIGIRR后，其NF-kB转录活性在LPS刺激后各时间均显著低于对照组，细胞因子IL-1β、TNF-α以及IL-6的水平亦显著低于对照组，过表达SIGIRR的A549细胞经LPS刺激后各时间点生长抑制率显著低于对照组。【结论】SIGIRR表达于人正常肺泡上皮细胞，并参与了LPS诱发的肺泡上皮急性炎症反应并起到负性调节作用，有助于细胞的生长及存活。
【图文】：
图 1 T LR 4 信号 转 导示 意 图 （ 文 献 3） M yD 8 8 于 19 9 0 年被 初次 命 名， 当时 是作 为 M 1D +骨髓 来 源前 体 应对 IL - 6 时进 行 最 终 分 化 而 诱 导 产 生 的 蛋 白 被 认 识 的 。 “M yD ” 意即 “ 骨髓 分 化 ” ， 88 代表 其 在 所 有 诱 导 产 生 的 基 因 中 的 序 列 号 [ 30 ] 。至 19 9 7 年， M yD 8 8 的功 能 开始 被 逐步 发 现。 通过 对 M yD 8 8 缺失 的小 鼠 的研 究 [ 31 ,3 2 ]得 知 ，M yD 8 8 参与 了 1 型白 介 1 受体 （ I L -1 R 1） [ 33 -3 6 ]的信 号转 导 ，随 后 又 发现 其 在多 种 TL R s的 信 号 转 导 中 均 有 参 与 [ 3 7，3 8 ]。 M yD 8 8 缺 失 的 小 鼠 显 示 出 对 TL R 2 , TL R 4, TL R 5, TL R 7 以及 TL R 9 的 配体 不 应答 。 M yD 8 8 在 内毒 素 引起 的 呼吸 道 炎症 中 起着 关 键作 用 [ 39 ]。M yD 8 8 处于 多 种 TL R 依 赖 或 非 依 赖 的 信 号 通 路 的 “ 交叉 路 口 ”[ 40 ]。在 M yD 8 8 敲除 的 小鼠 中， 急性 期 支气 管 收 缩， T N F 、I L -1 2 以 及 KC 的生 成 ，蛋 白 渗 漏 和中 性 粒 细胞 聚集 等 肺部 急 性 炎症 反 应均 完全 消 除 [ 39 ]。 M yD 8 8 不仅 参 与 TL R 信号 的
- 43 3b p4 33 bp -图 2- 1 . 经免 疫 组织 化学 染 色检 测， S IG IR R 在所 有 检测 的 20 例肺 组织 标 本中 均 有 表 达。 L in e I, S IG IR R 在正 常 肺泡 上 皮细 胞 的表 达 ; li n e II , 空 白对 照 （标 本 未经 一 抗 结 合， 替 换 为 等量 的 PB S） 。 20 0 倍放 大 。 3. 2 反转 录PC R检测 正常 肺组 织 及A5 4 9 细胞 中SI GI RR mR NA 的表 达经 RT - P C R 检测 ，所 有 20 例肺 组 织 标本 均 在 4 33 b p 处可 见 条带 （ 图 2- 2A ） ， A5 4 9 细 胞及 正 常 肺 组织 表 达 条带 均 处 于 43 3 b p 处（ 图 2 -2 B ）A5 00 bp -2 50 bp -- 50 0b p- 25 0b p
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R563.8
本文编号：2600283
【图文】：
图 1 T LR 4 信号 转 导示 意 图 （ 文 献 3） M yD 8 8 于 19 9 0 年被 初次 命 名， 当时 是作 为 M 1D +骨髓 来 源前 体 应对 IL - 6 时进 行 最 终 分 化 而 诱 导 产 生 的 蛋 白 被 认 识 的 。 “M yD ” 意即 “ 骨髓 分 化 ” ， 88 代表 其 在 所 有 诱 导 产 生 的 基 因 中 的 序 列 号 [ 30 ] 。至 19 9 7 年， M yD 8 8 的功 能 开始 被 逐步 发 现。 通过 对 M yD 8 8 缺失 的小 鼠 的研 究 [ 31 ,3 2 ]得 知 ，M yD 8 8 参与 了 1 型白 介 1 受体 （ I L -1 R 1） [ 33 -3 6 ]的信 号转 导 ，随 后 又 发现 其 在多 种 TL R s的 信 号 转 导 中 均 有 参 与 [ 3 7，3 8 ]。 M yD 8 8 缺 失 的 小 鼠 显 示 出 对 TL R 2 , TL R 4, TL R 5, TL R 7 以及 TL R 9 的 配体 不 应答 。 M yD 8 8 在 内毒 素 引起 的 呼吸 道 炎症 中 起着 关 键作 用 [ 39 ]。M yD 8 8 处于 多 种 TL R 依 赖 或 非 依 赖 的 信 号 通 路 的 “ 交叉 路 口 ”[ 40 ]。在 M yD 8 8 敲除 的 小鼠 中， 急性 期 支气 管 收 缩， T N F 、I L -1 2 以 及 KC 的生 成 ，蛋 白 渗 漏 和中 性 粒 细胞 聚集 等 肺部 急 性 炎症 反 应均 完全 消 除 [ 39 ]。 M yD 8 8 不仅 参 与 TL R 信号 的
- 43 3b p4 33 bp -图 2- 1 . 经免 疫 组织 化学 染 色检 测， S IG IR R 在所 有 检测 的 20 例肺 组织 标 本中 均 有 表 达。 L in e I, S IG IR R 在正 常 肺泡 上 皮细 胞 的表 达 ; li n e II , 空 白对 照 （标 本 未经 一 抗 结 合， 替 换 为 等量 的 PB S） 。 20 0 倍放 大 。 3. 2 反转 录PC R检测 正常 肺组 织 及A5 4 9 细胞 中SI GI RR mR NA 的表 达经 RT - P C R 检测 ，所 有 20 例肺 组 织 标本 均 在 4 33 b p 处可 见 条带 （ 图 2- 2A ） ， A5 4 9 细 胞及 正 常 肺 组织 表 达 条带 均 处 于 43 3 b p 处（ 图 2 -2 B ）A5 00 bp -2 50 bp -- 50 0b p- 25 0b p
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R563.8
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 修清玉;钱建美;王桂芳;黄海;方正;;不可分型流感嗜血杆菌诱导A549细胞分泌和表达前炎症细胞因子及机制研究[J];中国呼吸与危重监护杂志;2008年03期
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1 吴原;难治性癫痫患者脑组织中生长锥相关蛋白初步研究[D];重庆医科大学;2008年
本文编号：2600283
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