L-精氨酸对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响机制

发布时间：2020-03-26 12:56

【摘要】：目的：观察L-精氨酸(L-Arginine，L-Arg)对哮喘气道重塑大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth musele cell，ASMC)的细胞周期分布及细胞周期调节蛋白(cell cycle regulatory protein，CCRP)表达水平的影响，探讨L-Arg体内干预对哮喘大鼠ASMC增殖的可能干预机制。方法：选用SPF级健康大鼠60只，随机分成三组：对照组(正常对照)、哮喘组(哮喘模型)、干预组(L-Arg干预)，每组20只。利用卵白蛋白(OVA)加免疫佐剂(氢氧化铝)致敏和OVA激发的方法建立大鼠哮喘气道重塑模型，采用硝酸还原酶法检测血清NO_2~-/NO_3~-含量；各组大鼠支气管—肺组织行HE染色，光学显微镜观察支气管管壁的病理变化，图像分析技术测定支气管内管壁及肺内支气管平滑肌厚度；流式细胞仪检测ASMC的细胞周期分布；免疫组化染色法测定ASMC内CCRP cyclin E、cyclin A、cyclin B、P27~(kip1)的表达。结果： (1)哮喘组大鼠支气管粘膜增厚，皱襞增多，部分上皮细胞脱落，肺泡隔增厚，支气管内管壁、平滑肌层的厚度、ASMC数目显著大于对照组；干预组大鼠支气管内管壁的厚度、平滑肌层的厚度、ASMC数目显著小于哮喘组，但大于对照组。(2)哮喘组血清一氧化氮(nitricoxide，NO)水平明显低于对照组，而干预组则显著高于哮喘组。(3)哮喘组大鼠处于相对静止状态的G_0/G_1期ASMC比例及负性CCRP P27~(kipl)表达水平显著低于对照组；处于增殖状态的S期、G_2/M期ASMC比例及正性CCRP cyclinE、cyclinA、cyclinB表达水平显著高于对照组。(4)干预组G_0/G_1期ASMC比例及负性CCRP P27~(kipl)表达水平显著高于哮喘组；S期ASMC比例及正性CCRP cyclinE、cyclinA表达水平显著低于哮喘组。结论： (1) ASMC在哮喘病理状态下处于异常增殖状态。(2) NO可抑制哮喘大鼠ASMC的增殖，其机制可能系通过下调哮喘ASMC内正性CCRP的表达水平、上调负性CCRP的表达水
【图文】：

暨南大学硕士学位论文1.2.4气道平滑肌细胞增殖机制研究表明〔跳‘氏“」，cyclinD(Dl、D2或D3)是外界各种因素刺激ASMC进入GIA期的主要调控蛋白，cyclinD与细胞周期依赖性激酶CDK4或CDK6形成复合物可促使cyclinE表达，cyclinE是调控ASMC进入G:后期的周期蛋白，而cyclinE与CDK4结合形成复合物，通过促使Rb蛋白磷酸化并使其释放核转录因子EZF从而活化DNA聚合酶，促进ASMC通过G，/S限制点，进入自主分裂程序，因此cyclinE是调控ASMC增殖的重要细胞周期蛋白。在G，期至s期转换的每个时期〔62，63〕，均存在CKI对CDK或cyclin一CDK活性的抑制，使PRb保持去磷酸化且结合EZF及其他蛋白的状态，，从而抑制细胞周期的进展。

示意图,形态学,气道,横切面

图3[.1]气道横切面形态学侧t示意图.4气道平滑肌细胞的细胞周期分布测定1)气道平滑肌细胞的获取、分离各组大鼠于激发结束4一6小时后腹腔注射10%水合氯醛(3Omg无菌分离两肺(除右肺中叶)叶支气管及其分支，PBS冲洗后至于D手术显微镜下仔细剔除支气管周围的结缔组织、血管等，均匀剪碎成1皿xIllllnxllnln大小的组织块，置于用D一hanks配制的O.1%W型胶3~4小时，中间吹打两次，分别用100目和300目不锈钢滤网过滤除1000r/min离心smin，弃上清，再用PBS洗两次，制成细胞悬液，调整(2)a一ACtin抗体标记气道平滑肌细胞l)试管中加入4%的多聚甲醛室温固定40正n，I000r/min离心smin，洗一次，弃上清2)用0.25%TritonX一100液冰上作用smin，1000r/min离心smin，
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R562.25

【参考文献】