肺炎克雷伯杆菌生物被膜肺感染模型的建立及对抗生素的敏感性研究

发布时间：2020-04-22 05:12

【摘要】： 前言 肺炎克雷伯杆菌是存在于正常人肠道及呼吸道的重要的条件致病菌，它可粘附于机体腔道粘膜表面，分泌多糖基质，形成生物被膜(biofilm，BF)。细菌形成BF后，可逃逸机体免疫功能和抗菌药物的杀灭作用，常常使感染变得难治、易复发，使临床治疗极为棘手。肺炎克雷伯杆菌BF在慢性肺部感染性疾病中十分常见，，它引起的BF相关感染已被临床广泛关注。 要对细菌BF进行研究，首先要建立一个理想的实验模型，体内模型与体外模型相比，更有利于综合考虑内环境因素对细菌生物被膜的影响。关于肺炎克雷伯杆菌BF的体内研究国外学者对此报道不多，国内则未见报道。本课题采用吸入法在豚鼠体内建立肺炎克雷伯杆菌生物被膜肺感染模型，并通过活菌计数、光学及电子显微镜探讨肺内肺炎克雷伯杆菌BF的发生发展变化。研究头孢噻肟单用及与罗红霉素合用对肺内生物被膜肺炎克雷伯杆菌的杀菌作用，为生物被膜菌相关感染的防治提供依据。 实验方法 1．实验分组：50只豚鼠随机分为四组：A组10只，接种灭菌生理盐水；B组30只，接种肺炎克雷伯杆菌菌悬液；C组5只，单独应用头孢噻肟(赫美罗赫斯特医药公司，0.5g／支，批号B011004)皮下注射；D组5只，头孢噻肟皮下注射与罗红霉素(法国罗素公司，150mg／片，批号731)口服合用。 2．肺炎克雷伯杆菌生物被膜肺感染模型的建立：A、B两组 动物均事先给予地塞米松皮下注射，剂量为3m才kgi日，每日一 次，连续七天，以抑制豚鼠免疫功能。实验开始后第8天，每小组 5只动物置于与喷雾器配套的塑料容器内，A上两组动物分别接 种灭菌生理盐水及6．25 X 10、FU／Inl的肺炎克雷伯杆菌菌悬液， 通过喷雾器以0．765k才cm’压力，喷雾40min接种。A组在接种 灭菌生理盐水后第3＊天下组在接种肺炎克雷伯杆菌菌悬液后 第3＊＊ ＊ ＊7在1天各取5只动物手术取出肺组织。 3．抗生素的干预：C对组动物与A在组动物同时以上述同 样方法应用地塞米松及接种肺炎克雷伯杆菌菌悬液，并于接种后 第7天开始用药，C组单独应用头抱＠M皮下注射，剂量为 100mg／kg／日，每日二次，连用三天。D组应用头抱＠M皮下注射 （剂量同 C组）与罗红霉素口服K 日，每日二次）联合应 用，连用三天。接种后第 10天，比较 B人山三组动物肺内活菌数 及病理变化。 4．体内感染肺组织活菌数的测定：取一侧肺叶，用灭菌生理 盐水行支气管肺泡灌洗，反复3次从去除浮游菌。无菌切取小块 肺组织，称取组织块的重量，置于组织捣碎器内，加人豆d灭菌生 理盐水制成组织悬液，然后用灭菌生理盐水做10倍系列稀释至 1000倍，分别取各稀释度标本10pl接种于血琼脂平板上，于37℃ 培养过夜，并以最低可数的稀释倍数计算菌落数＊FU人然后换算 每克肺组织有多少CFU。 CFU／克肺组织一菌落数 X稀释倍数 X 100／称重肺组织重量 5．病理学检查：取材日，手术取出肺组织标本，分别用10％福 尔马林溶液及 2．5％戊二醛溶液固定lE及 PAS染色，普通光学 显微镜及扫描电镜（Scanning Elecbnic Micro％opy，SEM）观察。 6．统计分析 在接种细菌后第 10天对 B八月三组肺内活菌数取＊ 值进 行方差分析。 ·2· 结 果 1．B组有2只动物于接种后第1天死亡，其余动物在取材日 之前未再死亡。 2．肺炎克雷伯杆菌生物被膜肺感染模型的建立与鉴定 细菌学检测：整个实验过程中o组动物肺组织内未培养出细 菌人组动物在吸人肺炎克雷伯杆菌3天以后肺内培养出的细菌 菌落较小、生长缓慢、革兰氏染色发现菌体变短，此时肺内细菌数 量为 10’－10’CFU／g。第7、10上今天略有增力，在 10’－10’CFU／ g之间。14天以后细菌部分被清除，体内细菌数量有所下降，第 21天时基本稳定在10‘－10”’CFU／g。 光学显微镜检查：接种肺炎克雷伯杆菌后第3天，靠近胸膜边 缘实变肺组织内可见炎性细胞多灶性聚集，以中性粒细胞及淋巴 细胞为主。第7天，中性粒细胞减少，以淋巴细胞为主的炎性细胞 聚集形成颗粒样结节，结节外周由成纤维细胞及类上皮细胞包绕， 形成肉芽肿。第10＊ 天，肉芽肿颗粒的形成明显增大。第门。 ZI天带有细菌集落的肉芽肿颗粒略有减小，形成稳定的BF菌慢 性感染。 SEM观察：在接种细菌后第7天，肺组织的颗粒样结构内可 见到多糖蛋白复合物包绕的细菌，细菌菌体之间相互以粘液丝相 连，可见到淋巴细胞嵌于其中。接种后第10天，细菌聚集成团， 多糖蛋白复合物明显增多。 3．抗生素的治疗效果：接种细菌后第 10天，乙D二组肺内活 菌数明显少于 B组人组与 C组人组与 D组比较 p＜0．05人组 与 D组比较 p＜0．01。C组经抗生素治疗后肺内的颗粒样结构减 小JF内的粘液样物质及细菌数量减少为F厚度变薄。D组较C 组更为明显，SEM显示BF稀疏，细菌数量及细菌分泌的粘液样物 ·3·
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R563

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李乃静;何平;谷秀;刘勇;李胜岐;;抗生素对生物被膜菌产生β-内酰胺酶的影响[J];中国现代医学杂志;2006年19期

2 李乃静;李岩;潘作东;何平;李胜岐;;生物被膜肺炎克雷伯杆菌AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶的检测[J];中国临床药理学与治疗学;2008年04期

3 雷兆文;呼吸道的生物被膜病:慢性难治性肺部感染的关键环节[J];国外医学.呼吸系统分册;1997年04期

4 李乃静,李胜岐,孙勇海;改进平板法建立克雷白杆菌生物被膜[J];辽宁药物与临床;2001年03期

5 郑璐;余加林;;白色念珠菌生物被膜及其耐药机制研究进展[J];儿科药学杂志;2009年03期

6 王睿,裴斐,柴栋,朱曼,方翼,王中孝,刘皈阳;克拉霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的影响[J];中国抗生素杂志;2002年05期

7 张姝娜;郭生玉;李胜岐;;肺炎克雷伯菌生物被膜豚鼠肺感染模型建立的实验研究[J];中国微生态学杂志;2008年04期

8 徐志豪!310009杭州,刘富光!310009杭州,王选锭!310009杭州,原双晋!310009杭州,李丽红!310009杭州;红霉素、磷霉素对铜绿假单胞菌生物被膜体外作用的研究[J];中华结核和呼吸杂志;2001年06期

9 刘晓琰,施安国;细菌生物被膜的研究现状[J];中国临床药理学杂志;2002年04期

10 方向群,刘又宁,王睿,陈迁;阿奇霉素对氟罗沙星治疗生物被膜导致实验动物感染的增效作用[J];中华医院感染学杂志;2002年07期

相关会议论文 前10条

1 胡青海;韩先干;周小进;丁铲;于圣青;;鸭疫里默氏杆菌生物被膜的研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年

2 欧阳凤菊;刘慧芳;司微;王春来;赫明雷;倪洪波;刘思国;;禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

3 陈泗虎;李昌崇;;儿童产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯杆菌耐药基因分析[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年

4 刘定远;蒲友华;;49例儿童肺炎克雷伯杆菌肺炎耐药性分析[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

5 邹彬彬;漆涌;伍勇;;粪肠球菌相关基因,QS-frs系统与生物被膜形成关系的研究[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

6 邹彬彬;漆涌;伍勇;;尿路感染生物被膜菌临床分布及耐药性研究[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

7 王蓓;吴灶和;简纪常;鲁义善;汤菊芬;黄郁葱;;超声波平板法检测溶藻弧菌HY9901生物被膜的研究[A];中国南方十六省（市、区）水产学会渔业学术论坛第二十六次学术交流大会论文集（下册）[C];2010年

8 刘春涛;崔巍;;ICU中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌感染患者的预后分析[A];首届西湖重症医学论坛暨2011年浙江省重症医学学术年会论文汇编[C];2011年

9 齐激扬;余素飞;陈亚红;泮慧俐;李良;;肺炎克雷伯杆菌肺部感染的临床特点[A];2008年浙江省内科学学术会议论文汇编[C];2008年

10 杨新云;黎毅敏;魏理;张新凤;姜顺军;梁雪茵;陈斯韵;;大环内酯联用喹诺酮类药抑制铜绿假单胞菌生物被膜Meta分析[A];共铸医药学术新文明——2012年广东省药师周大会论文集[C];2012年

相关重要报纸文章 前10条

1 北京朝阳医院 张洪玉教授;生物被膜病在作怪[N];健康报;2000年

2 张洪玉;生物被膜病与慢性肺部感染[N];中国高新技术产业导报;2001年

3 中南大学湘雅医院 曾立明;细菌盖“棉被”药物难显效[N];大众卫生报;2004年

4 李聪然　钱皎;密度感知系统研究——为控制PA耐药提供新思路[N];中国医药报;2007年

5 浙江大学医学院附属第一医院 俞云松;铜绿假单胞菌耐药全国流行[N];健康报;2008年

6 吴一福;肝脓肿病因“胆源”变“隐源”[N];健康报;2007年

7 魏开敏;甲硝唑辅助治疗下呼吸道感染[N];医药经济报;2006年

8 吴一福;细菌性肝脓肿感染病因“易主”[N];中国医药报;2007年

9 记者 项铮;团山会议研讨罕见病原体防治策略[N];科技日报;2009年

10 孟庆明;临床专家阐述四点理由[N];中国医药报;2003年

相关博士学位论文 前10条

1 汪洋;猪链球菌生物被膜形成及致病机理研究[D];南京农业大学;2011年

2 孔晋亮;氨溴索对铜绿假单胞菌生物被膜作用的体外和体内研究[D];广西医科大学;2010年

3 王荔;Cid/Lrg调节系统对表皮葡萄球菌临床株生物被膜形成的调控机制的研究[D];天津医科大学;2012年

4 李妍;双联苄化合物riccardin D抗念珠菌生物被膜研究[D];山东大学;2012年

5 陈安群;新型突变mucA基因编码蛋白的亚细胞定位、对生物被膜形成的影响及其机制的探讨[D];华中科技大学;2010年

6 管希周;临床分离大肠杆菌和肺炎克雷伯杆菌高产AmpC酶的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年

7 储诚兵;复合克林霉素的磷酸钙水泥预防内植物感染的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年

8 张连波;密度感应系统对铜绿假单胞菌致病力及生物被膜形成影响的实验研究[D];吉林大学;2008年

9 王瑛;大环内酯类抗菌药对流感嗜血杆菌生物被膜的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年

10 杨维青;整合子在铜绿假单胞菌中的分布及其在生物被膜中作用机制的研究[D];四川大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 张姝娜;肺炎克雷伯杆菌生物被膜肺感染模型的建立及对抗生素的敏感性研究[D];中国医科大学;2002年

2 欧阳凤菊;禽致病大肠杆菌生物被膜检测及形成基因研究[D];东北农业大学;2010年

3 孟祥朋;猪链球菌生物被膜的生物学特性及噬菌体裂解酶对生物被膜的降解作用[D];上海交通大学;2011年

4 李丽;牛源金黄色葡萄球菌生物被膜相关基因分析及抗生素对其影响[D];山东师范大学;2011年

5 李颖佳;双J管生物被膜细菌耐药及其相关基因研究[D];中南大学;2011年

6 朱娟;细菌生物被膜耐药及形成相关基因调控机制的研究[D];中南大学;2011年

7 孔繁莉;肺炎克雷伯杆菌特异性卵黄抗体的制备及活性研究[D];大连医科大学;2011年

8 王耀霞;单增李斯特氏菌的分离鉴定及抑制或降解其生物被膜的研究[D];暨南大学;2012年

9 谢东;中西医结合治疗婴幼儿肺炎克雷伯杆菌肺炎的临床观察[D];湖北中医药大学;2012年

10 党敏燕;中草药提取物对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制作用及其机制研究[D];西北大学;2012年

本文编号：2636190