C5a诱导小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡机制的实验研究

发布时间：2020-05-03 16:37

【摘要】： 在某些类型的急性肺损伤中,肺泡上皮细胞凋亡在急性肺损伤发病机制中具有重要作用。有报道在小鼠鼻内滴入激活Fas的单克隆抗体,激活Fas凋亡通路可导致II型肺泡上皮细胞凋亡,并引起稍后发生的持久的炎症反应和组织损伤。补体激活产物C5a是一种重要的前炎症介质,发生严重感染时过度产生的C5a血浆中可以达到10-100nM水平,此时可触发细胞因子/趋化因子瀑布反应,导致全身炎症反应综合症(SIRS),这与器官潜在的损伤和多器官功能不全综合征(MODS)相关。已经证实C5a可影响不同的凋亡信号途径,并对不同类型的细胞产生促进或延迟细胞凋亡的效应,这可能也是C5a造成组织损伤的重要机制之一。calpain对于某些凋亡基因的激活也至关重要,如calpain可裂解并激活Bax并最终介导细胞色素C释放从而诱导细胞凋亡发生;然而另有报道μ-calpain的激活或C5a刺激均导致中性粒细胞的凋亡延迟,所以我们设想在C5a与胞膜上的C5aR结合进行信息的跨膜传导后,calpain在下游的胞内信号传导中发挥一定的作用。本研究将C5a作为刺激因素,观察其对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响,并对其机制进行初探,为急性肺损伤的防治提供实验依据。 方法: 1.小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离、纯化、鉴定及原代培养采用胰酶消化法分离昆明小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,电镜观察和碱性磷酸酶染色法鉴定所得细胞,六孔板中原代培养48小时备用。 2. C5a诱导小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡及检测实验设正常对照(A组)、C5a刺激组和PD150606干预组。正常对照组不加刺激因素。C5a刺激组分两部分,分别以C5a刺激剂量和C5a连续刺激时间作为变量交叉实验:1)固定C5a刺激浓度组(分别编为B、C、D组):C5a刺激时间分别为2h、6h、12h; 2)固定时相组(分别编为E、F、G组):均C5a刺激浓度分别为0.1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml。PD150606干预组(H组)根据以上两部分的实验结果选择产生最强凋亡事件的条件,与PD150606共同刺激细胞。每个实验组各6孔细胞。 各组细胞按计划完成刺激后,采用Annexin-V法进行FITC/PI双染,上流式细胞仪检测细胞的凋亡率。
【图文】：

第三军医大学硕士学位论文12图1-1 透射电镜下观察Ⅱ型上皮细胞，胞浆内可见特征性板层小体体（分别为×4200倍、×10000倍）图1-2 光镜下观察Akp染色的纯化Ⅱ型肺泡上皮细胞，可见胞浆内深蓝色酶反应产物（×400倍）

图1-1 透射电镜下观察Ⅱ型上皮细胞，，胞浆内可见特征性板层小体体（分别为×4200倍、×10000倍）图1-2 光镜下观察Akp染色的纯化Ⅱ型肺泡上皮细胞，可见胞浆内深蓝色酶反应产物（×400倍）
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R563.8

【共引文献】

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本文编号：2647810