金银花水煎液以及联合头孢他啶对绿脓杆菌生物膜作用的体外研究

发布时间：2020-05-07 17:14

【摘要】： 目的：1、探讨金银花水煎液在体外抑制绿脓杆菌（PA）形成生物膜（biofilm，BF）的能力。2、研究金银花水煎液在体外对绿脓杆菌BF的破坏能力及与头孢他啶（CAZ）的协同杀菌效果。方法：采用完全随机设计。1、观察药物对绿脓杆菌BF抑制作用的实验方法：以聚氯乙烯吸痰管作为BF载体，严格控制实验条件并在同等条件下制作绿脓杆菌体外BF模型共18份，，随机等分为三组，分别为空白对照组，金银花组和红霉素（EM）组，金银花及EM从开始制作BF模型时即分别加入绿脓杆菌悬液中，所用浓度对绿脓杆菌无杀灭作用，7天后计数载体表面粘附的活菌数并在电子扫描显微镜（SEM）下观察BF的形成情况，与空白对照组对照，以明确金银花和EM是否具有抑制绿脓杆菌形成BF的能力。2、观察药物对绿脓杆菌BF破坏作用的实验方法：制作绿脓杆菌体外BF模型共152份，将模型随机等分为两组，第一组观察不同药物及其组合对早期BF的作用，第二组观察不同药物及其组合对成熟BF的作用。各组再随机等分为6小组，分别设为空白对照组，头孢他啶（CAZ）组，金银花组，EM组，金银花+CAZ组和EM+CAZ组，空白对照组的观察时间点为0，4，8，24小时，各药物组加药后的观察时间点分别为4，8，24小时，每个小组均于第24小时用SEM观察BF的形成情况。结果：1、观察药物对BF抑制作用的实验中BF载体表面的活菌计数：金银花组和EM组均低于空白对照组（P0.01），SEM下空白对照组有大量BF形成，而金银花组和EM组几乎不形成BF。2、观察药物对早期BF作用的实验中BF载体表面的活菌计数：金银花组，EM组和空白对照组之间无差别（P0.05），而CAZ组则低于前述三组（P0.01）； WP=5 EM+CAZ组和金银花+CAZ组之间无差别（P0.05），但均低于CAZ组（P0.05）。SEM下空白对照组有大量BF形成，金银花组和EM组BF较少，但可见较多裸菌粘附于载体表面，EM+CAZ组和金银花+CAZ组中载体表面的BF和裸菌均少。3、观察药物对成熟BF作用的实验中BF载体表面的活菌计数：金银花组、EM组和空白对照组之间无差别（P0.05），而CAZ组低于前述三组（P0.01）；EM+CAZ组和金银花+CAZ组均低于CAZ组（P0.01），且金银花+CAZ组低于EM+CAZ组（P0.05）。SEM下空白对照组有大量BF形成，金银花组和EM组BF形成较少，且金银花组较EM组更少，但两组均可见较多裸菌附着于载体表面，EM+CAZ组和金银花+CAZ组中的BF和裸菌均少。结论：1、金银花能明显抑制绿脓杆菌形成BF，并能抑制绿脓杆菌对固体表面的粘附能力，其抑制效果与EM相当。2、金银花能破坏绿脓杆菌的早期和成熟BF，与EM相比，二者对早期BF的破坏效果相当，而对于成熟BF则金银花的破坏作用更明显。由于以上作用，金银花在体外能增强CAZ对早期和成熟BF内PA的杀菌能力，对于成熟BF，金银花的这种协同效果较EM更明显。
【图文】：

载体,细菌,绿脓杆菌,粘液

二、 SEM 观察结果㈠、早期和成熟 BF 的 SEM 表现绿脓杆菌在无菌生理盐水中培养 7 天的空白 BF 载体（图 4）：未见细菌和片状 BF 附着在载体表面，只见载体表面原有的规则纹理。载体在绿脓杆菌悬液中培养 24 小时（图 5）：细菌已表现出对固体表面的粘附性，这种粘附较为紧密，用无菌生理盐水轻轻仔细冲洗已不能使其脱落，此时细菌尚未聚集成堆，而是分散排列，尚无 BF 形成。无药物作用的早期 BF（图 6）和成熟 BF（图 7）：可见在载体表面有绿脓杆菌 BF 呈片状分布，BF 内细菌呈短杆状，菌体长短不一，彼此聚集成堆，周围有凹凸不平的浓厚粘液状物质紧密包绕，细菌借助这些浓厚的粘液状物质连接成大片 BF。

绿脓杆菌,悬液,载体,细菌

【引证文献】