沙美特罗对哮喘小鼠炎症反应和树突状细胞分泌促炎因子功能的影响

发布时间：2017-03-24 14:02

  本文关键词：沙美特罗对哮喘小鼠炎症反应和树突状细胞分泌促炎因子功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的：以急性哮喘小鼠模型为研究对象，选取小鼠骨髓来源的树突状细胞（DCs）为研究目标，通过给与哮喘小鼠雾化吸入长效β2肾上腺素受体激动剂沙美特罗（salemeterol）以及体外培养树突状细胞，研究长效β2肾上腺素受体激动剂沙美特罗对哮喘炎症反应以及DCs分泌促炎因子的影响。以此来探索长效β2肾上腺素受体激动剂对于支气管哮喘治疗的新机制。 研究方法：制备并鉴定急性哮喘小鼠的模型，取40只年龄6-8周、体重相近的雌性BALB/c小鼠，随机化分为对照组，卵蛋白（OVA）模型组，卵蛋白+脂多糖（LPS）组和治疗组，每组10只小鼠，在第0,14天致敏分别对各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞计数并分类，酶联免疫吸附法（ELISA）法检测BALF中促炎因子白细胞介素1β（IL-1β），白细胞介素6（IL-6），肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平；对肺组织行阿新蓝-过碘酸雪夫（AB-PAS）染色和苏木素-伊红染色（HE）染色,了解气道炎症的程度；取血清采用ELISA法检测OVA-specific IgE的水平，了解沙美特罗除了能舒张气管平滑肌外，对急性哮喘气道炎症改善的作用并探讨其机制。采用粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）体外扩增C57BL/6小鼠DCs的方法，于DCs培养第6天给予不同浓度的沙美特罗干预，并加入外源性LPS，于培养不同时间点收集DCs。流式细胞仪检测DCs的凋亡及表面共刺激分子CD80、CD86、CD40、CD11c~+及MHC-Ⅱ类分子的表达；ELISA法检测上清中细胞因子促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α；real-time PCR检测促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达情况。 结果：（1）沙美特罗对哮喘小鼠BALF的影响：模型组和脂多糖组BALF中可见大量炎症细胞聚集，其中以嗜酸性粒细胞为主，且后者更为严重，对照组BALF中未见明显的炎症细胞聚集，而治疗组能明显减轻哮喘小鼠BALF中炎症浸润的程度。（2）沙美特罗对哮喘气道炎症的作用：HE染色和AB-PAS染色均提示模型组和脂多糖组部分支气管上皮粘膜有明显的杯状细胞增生，管腔内有大量粘液栓塞且气道周围大量炎症细胞聚集。对照组病理表现为支气管、血管周围均无炎症细胞浸润，无杯状细胞增生。治疗组小支气管、血管黏膜下炎症细胞数量明显减少，轻度杯状细胞增生。（3）沙美特罗对哮喘炎症因子水平的影响：取小鼠外周血，血清中检测OVA特异性的IgE，并在BALF中检测IL-1β，IL-6，TNF-α水平，其中模型组和脂多糖组明显高于对照组和治疗组，治疗组与脂多糖组之间差异有统计学意义。治疗组与模型组之间没有明显差异；（4）沙美特罗对DCs分泌促炎因子的影响：体外培养DCs，通过流式检测不同药物浓度引起细胞凋亡的程度，发现沙美特罗浓度为10-4mol/L能够引起DCs的明显凋亡，从基因及蛋白水平检测促炎因子IL-1β，IL-6，TNF-α表达水平在DCs中的变化；结果是在蛋白水平中，浓度为10-5mol/L的沙美特罗抑制DCs分泌促炎因子最明显，DCs在沙美特罗刺激3小时后IL-1β，IL-6，TNF-α基因表达受到明显抑制。 结论：⑴沙美特罗能改善哮喘小鼠炎症病情，并能明显减轻肺泡灌洗液及气道周围炎症程度。⑵沙美特罗通过抑制促炎症因子水平，调控哮喘炎症反应。⑶沙美特罗影响哮喘的机制可能是通过起着关键免疫作用DCs而起作用的。
【关键词】：支气管哮喘 树突状细胞 沙美特罗 促炎因子
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 缩略词表9-10
• 前言10-14
• 材料与方法14-29
• 一、对象和试剂14-18
• 二、实验方法18-29
• （一）急性哮喘小鼠模型的建立及鉴定18-19
• （二）实验动物分组19-20
• （三）取材及标本处理20-21
• （四）各种染色步骤21-23
• （五）ELISA 实验步骤23-24
• （六）小鼠 DCs 的培养与鉴定24-28
• （七）统计学处理28-29
• 结果29-38
• 讨论38-43
• 全文小结43-45
• 参考文献45-49
• 综述49-59
• 参考文献54-59
• 发表论文及科研情况59-60
• 附发表英文论著一篇60-68
• 致谢68-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 周林福,殷凯生;Toll-like receptors: function and roles in asthma[J];Chinese Medical Journal;2004年11期

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本文编号：265685