肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠miRNA-29b和caspase-3及caspase-7的影响

发布时间：2017-03-25 18:08

  本文关键词：肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠miRNA-29b和caspase-3及caspase-7的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：检测肺痨康治疗耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中caspase-3、caspase-7和miRNA-29b的表达水平,探讨肺痨康治疗耐异烟肼肺结核的机制,为中医药治疗耐药肺结核的机制提供新思路。方法：1.SPF级昆明种小鼠尾静脉注射耐异烟肼结核分枝杆菌菌悬液,建立耐异烟肼肺结核小鼠模型,以生理盐水、肺痨康、异烟肼、肺痨康联合异烟肼灌胃56天；尾静脉注射H37RV标准结核分枝杆菌菌悬液,建立肺结核小鼠模型,以生理盐水灌胃56天；另设空白对照组,以生理盐水灌胃56天；2.免疫组化检测各组小鼠肺组织中caspase-3、caspase-7表达水平；3.采用Real time quantity-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)技术检测各组小鼠肺组织中miRNA-29b的表达水平；4.采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行统计学分析。结果：1.空白对照组小鼠肺组织未检测出结核分枝杆菌；耐异烟肼肺结核模型组小鼠、标准菌肺结核模型组小鼠肺组织均检测出结核分枝杆菌。2.根据免疫组化评价标准,与空白对照组小鼠肺组织比较,caspase-3在标准菌肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P0.01),在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P0.05)；经过肺痨康干预后,caspase-3的表达高于空白对照组(P0.05),但比治疗前下降；经过肺痨康联合异烟肼干预后,caspase-3的表达与空白对照组无显著差异(P0.05)；经过异烟肼干预后,caspase-3的表达高于空白对照组(P0.05)。3.根据免疫组化评价标准,与空白对照组小鼠肺组织比较,caspase-7在标准菌肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P0.01),在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P0.01)；经过肺痨康联合异烟肼干预后,caspase-7的表达与空白对照组无显著差异(P0.05)；经过肺痨康干预后,caspase-7的表达与空白对照组无显著差异(P0.05)；经过异烟肼干预后,caspase-7表达与空白对照组无显著差异(P0.05)。4.在空白对照组小鼠肺组织中,MiRNA-29b的表达最低；与空白对照组比较,MiRNA-29b在标准肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P0.01),在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中高表达(P0.01),且在耐异烟肼肺结核模型组小鼠肺组织中最高；与耐异烟肼肺结核模型组比较,miRNA-29b的表达在肺痨康干预后降低(P0.01),在异烟肼干预后降低(P0.01),在肺痨康联合异烟肼干预后降低(P0.05),其中肺痨康、肺痨康联合异烟肼干预后,下降幅度大于异烟肼干预后的结果。肺痨康、肺痨康联合异烟肼干预后miRNA-29b的表达相近,且都低于在标准肺结核模型中的表达。结论：1.小鼠尾静脉注射耐异烟肼结核杆菌菌悬液,7天后,小鼠肺组织中检测出结核杆菌,说明这种方法造模可行。2.在耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中,caspase-3的免疫组化染色表达升高,经过肺痨康干预后降低,说明肺痨康治疗耐异烟肼肺结核,可能与caspase-3引起的细胞凋亡有关。3.在耐异烟肼肺结核小鼠肺组织中,caspase-7的免疫组化染色表达升高,经过肺痨康干预后降低,说明肺痨康治疗耐异烟肼肺结核,可能与caspase-7导致的细胞凋亡有关。4.MiRNA-29b在耐异烟肼肺结核小鼠模型肺组织中呈高表达,经过肺痨康干预后降低,说明肺痨康抗耐异烟肼肺结核,可能通过miRNA-29b的降低而发挥作用。
【关键词】：肺痨康 耐异烟肼肺结核小鼠 MiRNA-29b Caspase-3 Caspase-7
【学位授予单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R521
【目录】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-7
• 英文缩略词表7-11
• 引言11-13
• 实验研究13-38
• 第一部分 耐异烟肼肺结核小鼠模型的建立13-19
• 1 实验材料13-14
• 1.1 实验动物13
• 1.2 实验试剂及配置13
• 1.3 实验仪器、设备和器材13
• 1.4 实验菌株13-14
• 1.5 实验场地14
• 2 实验方法14
• 2.1 实验动物分组14
• 2.2 造模方法14
• 3 观察指标及方法14-15
• 3.1 小鼠体征和体重14
• 3.1.1 小鼠体征14
• 3.1.2 小鼠体重14
• 3.2 肉眼下小鼠肺部形态观察14
• 3.3 小鼠肺部细菌培养与菌落计数14-15
• 4 统计学处理方法15
• 5 实验结果15-17
• 5.1 小鼠体征和体重变化15-16
• 5.1.1 一般体征变化15
• 5.1.2 体重变化15-16
• 5.2 小鼠肺部形态变化16-17
• 5.3 小鼠肺部结核分枝杆菌培养四周的菌落计数17
• 6 数据分析及小结17-19
• 第二部分 肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠中caspase-3和caspase-7的影响19-33
• 1 实验材料19-20
• 1.1 实验动物19
• 1.2 实验药物19
• 1.3 实验试剂及配置19
• 1.4 实验仪器、设备和器材19-20
• 1.5 实验菌株20
• 1.6 实验场地20
• 2 实验方法20-21
• 2.1 干预用药的制备及用法用量20-21
• 2.2 实验动物分组21
• 2.3 造模方法21
• 2.4 药物干预方法21
• 3 观察指标及方法21-24
• 3.1 小鼠体征及体重21
• 3.2 小鼠肺部形态21-23
• 3.2.1 肉眼下形态观察21-22
• 3.2.2 光镜下形态观察22-23
• 3.3 小鼠肺部细菌培养与菌落计数23-24
• 4 小鼠caspase-3和caspase-7的测定24-25
• 4.1 标本准备24
• 4.2 标本检测24-25
• 4.3 染色判定25
• 4.4 图像采集及观察25
• 5 统计学处理方法25
• 6 实验结果和分析25-30
• 6.1 小鼠体征、体重改变25-27
• 6.1.1 一般形态变化25-26
• 6.1.2 体重变化26-27
• 6.2 小鼠肺部形态变化27-28
• 6.2.1 肉眼观察下的变化27-28
• 6.2.2 HE染色光镜下小鼠肺部病理形态改变28
• 6.3 小鼠肺部结核杆菌培养与菌落计数28-29
• 6.4 小鼠肺组织caspase-3的表达29
• 6.5 小鼠肺组织caspase-7的表达29-30
• 7 实验结果分析和小结30-33
• 7.1 体重统计结果分析30-31
• 7.2 肉眼下观察结果分析31
• 7.3 光镜下观察结果分析31
• 7.4 小鼠肺部结核杆菌培养与菌落计数31
• 7.5 免疫组化caspase-3统计结果分析31-32
• 7.6 免疫组化caspase-7统计结果分析32
• 7.7 小结32-33
• 第三部分 肺痨康抗治疗异烟肼肺结核小鼠中MiRNA-29b的表达意义33-38
• 1 实验材料33
• 1.1 实验试剂33
• 1.2 实验仪器和设备33
• 1.3 标本准备33
• 1.4 实验场地33
• 2 实验方法33-35
• 2.1 RNA的提取和鉴定33-34
• 2.2 引物设计34
• 2.3 Real time quantity-PCR34-35
• 2.4 分析方法35
• 2.5 统计学方法35
• 3 实验结果35-36
• 4 实验结果分析及小结36-38
• 讨论38-49
• 1 肺结核的研究及治疗概论38-40
• 1.1 中医对肺结核的研究及治疗38-39
• 1.1.1 中医对肺结核病因病机认识38-39
• 1.1.2 中医对肺结核的防治39
• 1.2 西医对肺结核的治疗概论39-40
• 2 耐药肺结核的研究40-42
• 2.1 耐药肺结核的产生和分子机制探讨41
• 2.2 耐药肺结核的治疗41-42
• 2.2.1 中医药对耐药肺结核的治疗41-42
• 2.2.2 西医对耐药肺结核的治疗42
• 3 肺痨康的探讨42-44
• 3.1 肺痨康来源、应用42-43
• 3.2 药物分析43-44
• 3.3 配伍意义44
• 4 对耐异烟肼结核小鼠模型的评价44-45
• 5 对阳性药物的评价45
• 6 对caspase-3和caspase-7在肺痨康抗耐异烟肼肺结核中的探讨45-47
• 6.1 caspase的概况46
• 6.2 Caspase-3、caspase-7在结核中的表达46-47
• 6.3 Caspase-3在肺痨康抗耐异烟肼肺结核中的表达及意义47
• 6.4 Caspase-7在肺痨康抗耐异烟肼肺结核中的表达及意义47
• 7 对MiRNA-29b在肺痨康抗耐异烟肼肺结核中的探讨47-49
• 7.1 MiRNA的概况47-48
• 7.2 MiRNA与结核病的研究48
• 7.3 MiRNA-29b与肺痨康抗耐异烟肼肺结核的表达及意义48-49
• 结论49-50
• 问题和展望50-51
• 致谢51-52
• 参考文献52-58
• 附件1：附图58-61
• 附件2：文献综述61-67
• 参考文献65-67
• 附件3：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果67-68

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  本文关键词：肺痨康对耐异烟肼肺结核小鼠miRNA-29b和caspase-3及caspase-7的影响，由笔耕文化传播整理发布。

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