内毒素肺损伤小鼠肺内清道夫受体A表达及其作用研究

发布时间：2020-05-25 02:02

【摘要】： 本文采用腹腔注射内毒素的方法复制小鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)模型，旨在观察ALI发病过程中肺组织及肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage, AM)清道夫受体A(scavenger receptor class A, SR-A)的表达，探讨SR-A对LPS的结合或清除作用及其对巨噬细胞(macrophage，Mφ)释放炎症因子TNF-α的影响；并采用细胞培养的方法，观察增强巨噬细胞SR-A表达是否有助于对LPS的结合或清除并减少炎症因子的释放,以期进一步探讨SR-A的作用机制。 实验分组：动物实验分为内毒素0.5h、1h、2h、4h、8h组及生理盐水对照组。细胞实验分为①Mφ＋LPS组；②PMA＋Mφ＋LPS组；③PMA＋Mφ＋2F8＋LPS组。每组又分为内毒素0.5h、1h、2h、4h、8h组及无血清培养液对照组，每个时相点及对照组均设4个复孔。 结果显示：①生理盐水对照组小鼠肺组织除支气管上皮细胞没有SR-A表达外，AM、肺血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、肺泡上皮细胞、中性粒细胞均有表达。内毒素致伤后1h即可观察到肺组织SR-A免疫组化染色弱于生理盐水对照组，并且随着致伤时间的延长，表达强度逐渐下降，且几种细胞下降趋势一致。分离AM作细胞免疫化学染色，结果类似。以上结果表明，内毒素可以下调肺内SR-A的表达。用J774A.1细胞作体外实验也发现类似结果，以4h、8h组降低最为显著。流式细胞仪检测AM及J774A.1细胞的SR-A表达与免疫化学染色结果相符，且细胞膜的SR-A下降较细胞总的SR-A下降显著。②生理盐水对照组小鼠肺组织匀浆液中LPS含量为0.32±0.21 EU/ml，腹腔注射内毒素0.5h即可在肺组织检测到大量内毒素，含量为11.09±2.76 EU/ml；内毒素各组肺组织LPS含量均非常显著高于生理盐水对照组(P0.01)；内毒素1h、2h、4h、8h组肺组织LPS含量均非常显著低于0.5h组(P0.01)，但1h、2h、4h、8h组各组间无显著差异(P0.05)。③ELISA结果显示，小鼠腹腔注射内毒素后0.5h、1h、2h、4h、8h肺组织TNF-α含量均非常显著高于生理盐水对照组(P0.01)，并随注射内毒素时间延长而逐渐上升，2h达到峰值。④体外培养结果表明，佛波酯刺激巨噬细胞72h后，SR-A表达增加。⑤佛波酯上调SR-A表达后，用含LPS的培养液培养0.5h、1h、2h、4h、8h，细胞上清中LPS含量非常显著低于对应时相点无佛波酯组(P0.01)，且用SR-A单克隆抗体阻断SR-A后，可抑制LPS含量减低。⑥ELISA结果 显示，无血清培养液对照组细胞培养上清中仅检测到微量TNF-α，，LPS刺激后0.5h即可检测到大量TNF-α，并随时间延长而逐渐增加，1h达到峰值。佛波酯+LPS组细胞培养上清中TNF-α含量非常显著低于无佛波酯组(P0.01)，用SR-A单克隆抗体阻断SR-A后，可抑制佛波酯上调SR-A后所致的TNF-α含量减低。 以上结果表明：①内毒素肺损伤发病过程中肺组织及AM SR-A表达下降。②佛波酯上调巨噬细胞SR-A表达后，可以促进巨噬细胞对LPS的结合，用SR-A单克隆抗体阻断SR-A后，这种促进作用被抑制，推测LPS在肺内滞留可能与SR-A的表达下降有关。③内毒素肺损伤发病过程中肺组织匀浆中TNF-α水平升高，而体外实验显示上调SR-A的表达可以减少TNF-α的释放，用SR-A单克隆抗体阻断SR-A后，这种作用被抑制，推测肺组织及AM SR-A表达下降，可能是导致炎症因子产生增多的机制之一。
【图文】：

0 流式细胞仪检测 M 与 FITC-LPS 的TC-LPS+M 组 B: FITC-LPF8+FITC-LPS+M 组 D: PMA+FITJ774A.1 细胞与 FITC-LPS 结合的平均2F8+FITC-LPS+M PMA+FITC-LP25.80 78.56 上清中 TNF- 含量血清培养液对照组细胞培养上清 0.5h 即可检测到 TNF- 水平升高+LPS 组细胞培养上清中 TNF- 隆抗体阻断 SR-A 后 佛波酯降
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R563

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本文编号：2679372