脂多糖激活补体对内皮细胞的作用及抑制补体对脂多糖致急性肺损伤的影响

发布时间：2020-05-26 02:28

【摘要】：目的：在细胞水平上研究脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活血清补体对内皮细胞的作用和影响。评价特定抗补体活性物质对LPS激活补体损伤内皮细胞以及LPS致急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的保护作用。 方法：研究LPS激活血清补体的作用方式和特点,观察LPS激活补体对内皮细胞表达粘附分子和凋亡的影响。采用ELISA法检测内皮细胞释放P-selectin、E-selectin和ICAM-1的变化,化学发光法检测Caspase-3/7的活化情况,SRB法检测LPS激活补体对内皮细胞生长的影响。在前期工作中发现,香椿果活性多酚是一个高活性的抗补体物质,能强烈地抑制补体激活。本实验通过测定内皮细胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1和Caspase-3/7的变化情况,评价香椿果抗补体活性多酚对LPS激活血清补体损伤内皮细胞的作用。动物实验采用LPS致ALI模型,其中控制补体的实验组分别提前2h给予蛇毒新型抗补体蛋白Atrase A和提前24 h给予眼镜蛇毒因子(cobra venom factor, CVF)。在给予LPS后1h、6h、12h采集标本,测定各组血清补体活性和肺含水量,取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)测定细胞数、蛋白含量、TNF-α、P-selectin含量,比色法测定肺组织匀浆中髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量,取肺组织行病理切片检查,评价两种抗补体蛋白对大鼠ALI的保护作用。 结果：LPS能够激活血清补体,这种激活呈现量效、时效性。LPS激活血清补体可诱导内皮细胞瞬时显著释放P-selectin, E-selectin和ICAM-1表达也明显上调,同时可导致Caspase-3/7的活化。在本实验条件下,LPS激活血清补体对内皮细胞生长未产生抑制。香椿果抗补体活性多酚不能下调LPS激活补体损伤内皮细胞表达粘附分子和诱导凋亡。在动物实验中,模型组给予LPS后出现了典型的ALI症状,大鼠血清补体活性明显下降。抗补体蛋白实验组均能明显降低大鼠血清补体水平、肺组织MPO含量和BALF中细胞数、TNF-a和P-selectin含量,减轻肺组织炎症反应；但对肺含水量和BALF中蛋白含量的影响无统计学意义。 结论：LPS激活血清补体可损伤内皮细胞,导致内皮细胞显著表达粘附分子以及发生凋亡。香椿果抗补体活性多酚虽能强烈抑制补体经典途径和替代途径激活,但对LPS激活补体损伤内皮细胞没有保护作用。采用两种不同类型的抗补体蛋白能有效减轻ALI的病理损伤,但两者的保护作用特点存在显著差异,其中Atrase A明显优于CVF,提示Atrase A所作用的某些补体特定靶标成分在ALI中具有重要作用。
【图文】：

3.1LPS激活血清补体诱导内皮细胞损伤的情况 3.1.1LPS+NHS孵育混合物加入量的确定不同比例稀释度的溶血活性显示，1:10为最佳稀释度(图2)。LPS在预孵条件下，能激活补体经典途径和替代途径，，这种激活具有剂量依赖性(图3)和时间依赖性(图4)。在预孵Zh的条件下，对经典途径和替代途径溶血的ICS。分别为 118.48mg·L一1、 195.82mg·L一l。100 275505

本文编号：2681136