BMSCs移植对家兔急性肺损伤的保护作用及hAng1真核表达载体的构建与测序

发布时间：2020-05-26 01:51

【摘要】：设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-10/2008-01在唐都医院中心实验室完成。 目的：探讨骨髓间充质干细胞移植对内毒素诱发急性肺损伤模型兔的保护作用以及构建人血管生成素1（human angiopoietin 1,hAng-1）真核表达载体pcDNA3.1+-hAng1，为下一步实验做好基础。 方法：?Ficoll法分离培养兔骨髓间充质干细胞，传至第3代备用。肺损伤模型组、细胞移植组兔通过向气管内滴注内毒素建立ALI/ARDS，造模成功30 min后，细胞移植组经右侧颈静脉注入骨髓间充质干细胞悬浮液2mL(细胞数1×105)，盐水对照组、肺损伤模型组同法给予等量生理盐水。血管生成素1基因片段经巢式聚合酶链反应方法扩增，血管生成素1基因片段及载体pcDNA3.1+分别经HindⅢ和XhoⅠ双酶切，之后经T4连接酶连接，，构成pcDNA3.1+-hAng1。 结果：湿干比值升高提示肺水肿的存在，中性粒细胞数量增加提示较重的炎性反应存在，蛋白含量升高提示肺泡-毛细血管内膜屏障受损。移植48 h后与盐水对照组比较，肺损伤模型组支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、蛋白含量均明显升高(P 0.01)，湿干比明显升高(P 0.01)；与肺损伤模型组比较，细胞移植组支气管肺泡灌洗液中性粒细胞数目、蛋白含量均明显降低(P 0.01)，湿干比明显降低(P 0.01)。苏木精-伊红染色结果显示，盐水对照组肺泡组织结构正常，肺损伤模型组肺组织出现典型的急性肺损伤改变，细胞移植组肺组织病理变化较轻。?酶切鉴定显示经HindⅢ和XhoⅠ酶切后，TBE胶电泳可得1.5KB大小的hAng1片段和5.4KB大小的pcDNA3.1+片段；合成载体送北京奥科公司测序鉴定，其序列结果与GENBANK中所载完全一致。 结论：利用骨髓间充质干细胞移植可显著减轻内毒素诱导的急性肺损伤。利用基因重组和双酶切构建出了pcDNA3.1+-hAng1，为进一步研究其功能和活性奠定了基础。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R563

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本文编号：2681088