表皮生长因子受体在可溶性锌化合物致大鼠急性呼吸道炎症中的作用

发布时间：2020-05-31 06:09

【摘要】：表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)是表皮生长因子受体家族成员之一,是原癌基因c-erbB 1的表达产物,分子量大约170kd.EGFR可通过直接和间接两条途径被激活。活化的EGFR可通过下游信号导通路激活基因转录因子,进而启动细胞核内有关基因的转录、调节蛋白合成、细胞分裂、增殖和分化和炎症性反应等。 锌也普遍存在于空气微细颗粒污染物中。锌在颗粒物所含多种金属中所占比例最高。当前的主导观点认为空气微细颗粒物的呼吸道毒性与其化学成分,尤其与某些可溶性金属离子相关。体内研究发现,吸入含锌颗粒物或者气管滴注锌盐溶液均能引起呼吸道炎症。体外研究显示,外源锌离子可激活细胞内多个信号传导通路,如表皮生长因子受体(EGFR)等。EGFR磷酸化启动了呼吸道上皮细胞信号通路,在组织修复及正常的细胞的动态平衡过程中起到重要作用。但是EGFR在锌离子致呼吸道损伤过程中的作用还不清楚。研究目的 探讨锌离子对大鼠呼吸道EGFR表达及活化的影响以及EGFR在锌离子诱导呼吸道炎症过程的作用。 材料与方法 1.复制动物炎症模型。清洁级雄性Wistar大鼠30只采用随机分为6组,每组5只,支气管灌注法分别给予PBS和硫酸锌溶液各3组,分别于灌注后4 h、8 h、24 h处死。 2. EGFR信号传导通路阻断实验。清洁级雄性Wistar大鼠20只随机分为4组,每组5只。用DMSO或PD153035溶液预灌注各2组,约30min;经过预灌注处理的2组大鼠分别灌注PBS或硫酸锌溶液,于灌注后8h处死。 3.观察指标。收集支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid, BALF),使用ELISA试剂盒检测IL-8和LDH含量；考马斯亮蓝法检测总蛋白渗出情况；计数渗出炎症细胞；肺组织做病理切片观察炎症细胞浸润情况。Western blot检测EGFR表达及Tyr1068活化情况。 4.采用统计软件SPSS12.0进行数据分析,数据以x±s表示。应用2×3析因设计方差分析,比较不同灌注液及时间对大鼠急性呼吸道炎症的影响,筛选最佳时间；应用2×2析因设计方差分析,比较预灌注液和灌注液的主效应及其交互作用。检验水准α=0.05。 结果 1.锌离子能引起大鼠呼吸道炎症。灌注硫酸锌8h后BALF白细胞计数含量为3.44×109/L；灌注PBS 8 h后BALF白细胞计数为1.89×109/L。不同灌注液作用后大鼠BALF白细胞计数(F=12.149,P0.01)不同。灌注硫酸锌4h、8h和24 h后白细胞计数分别为2.01×109/L、3.44×109/L和1.03×109/L。不同时间点白细胞计数(F=29.569,P0.01)也不同。 2.PD153035能够抑制锌离子引起的呼吸道炎症。不同预灌注液作用后大鼠白细胞计数、总蛋白、LDH和IL-8含量(F=37.872、26.212、28.741和24.347,P0.01)不同。PD153035预灌注组中硫酸锌所致炎症反应较DMSO组中硫酸锌的作用明显减弱；PD153035硫酸锌组EGFR表达量(271.818)及Tyr1068磷酸化(239.676)较DMSO组明显减少(436.320和428.360)。 结论 硫酸锌溶液能够引起大鼠呼吸道急性炎症；硫酸锌可致大鼠呼吸道细胞内EGFR磷酸化；PD153035可明显减弱硫酸锌所致的EGFR磷酸化和大鼠呼吸道急性炎症程度。
【图文】：

置于电泳转移液中浸泡，浸泡时间大约巧而n。2)浸泡后，取出凝胶、PVDF膜和滤纸，精确对齐，叠成“三明治”形式，如图1所示。从“+”极到“一”极的顺序依次是:3层滤纸、PVDF膜、凝胶、3层滤纸，放在半干式电转仪中，小心地用玻璃棒排出所有气泡，接通电源开始转膜，转膜条件为11llA/c扩膜，90mino一5晰id即十阳胎fe。+丫一~~、、、‘洲、烈!钱3从从户Qp‘r州粼c粼红犷公柞e，一一气，，-.一~--一抽妇一一‘甲一一-~一一，户内内，，内户州冲内中，曰两.，...

图3Bradford法测定蛋白浓度的标准曲线计算结果注液作用后BALF中总蛋白含量(F=50.436，尸<0.01)不同，引起总蛋白含量升高;不同时间点总蛋白含量伍二10.582，，尸4h和24h比较sh总蛋白含量最高，见图4。不同灌注液和用(F=7.988，p=0.002)。表SBALF蛋白含量结果(g·ul)。=5PBs硫酸锌F时间(P)F组别(尸)F0.63士0.381.11士0，390.12士0.171.85士0.622.93士0.580.42士0.2541.58250.43670.0010.0010
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R56

【参考文献】

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本文编号：2689422