胰岛素样生长因子1作用下的骨髓间充质干细胞对大鼠肺纤维化的治疗作用及其机制

发布时间：2020-06-03 01:42

【摘要】：目的：通过观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)作用过的骨髓间充质干细胞(BMSC)对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的影响,探讨治疗肺纤维化的新方法。方法：体外分离、培养雄性6周龄SD大鼠的BMSC。将48只雄性成年SD大鼠(体重200-240g)随机分为4组,阴性对照组(N),博莱霉素组(B),间充质干细胞组(M),IGF处理组(I)。处理方法为：N组经支气管注入1ml生理盐水,B、M、I组均经支气管注入1ml博莱霉素(5mg/kg)。在造模2d后,B组大鼠经尾静脉注入生理盐水0.5ml,M组大鼠经尾静脉注入CM-Dil标记的骨髓间充质干细胞0.5ml(细胞数为2×106),I组注入相同数量的标记BMSC(经过IGF-1培育48h)。在造模的第7d、14d、28d批量处死各组大鼠,留取肺组织进行HE染色、Masson染色评价肺组织病理变化,冰冻切片观察肺组织内细胞定植情况、消化法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,RT-PCR方法检测各组大鼠肺组织肝细胞生长因子(HGF) mRNA的表达水平。结果：M、I组在显微镜下可见红色荧光标记的BMSC, I组不同时间点的IOD值均高于M组,且M、I组的荧光在28d时都有所衰减。M、I组的炎症在实验早期便轻于B组,其中M组更明显,至28天时M、I组炎症评分与N组无统计学差异。B、M、I组肺纤维化评分在博莱霉素注入14d时都明显高于N组(分别P0.01,P0.05,P0.05),28d时M,I组的肺纤维化程度轻于B组(分别P0.05,P0.01),但M、I两组之间始终不存在统计学差异。B组的羟脯氨酸含量在整个实验阶段均高于其他三个组(P均0.01),而I组的值始终与N组无差异(P均0.05),M组的值在早期大于I、N组,至28d降至与对照组间没有统计学差异。N组、B组的HGFmRNA表达一直保持在较低水平,M、I组HGFmRNA的表达水平在第7d时没有差异,均高于N、B组(P均0.01),至第14d时I组的值开始高于M组(P0.05),28d时这种差异更加明显(P0.01) 结论：IGF-1可以促进BMSC异体定植从而对肺损进行更有效的修复,机制可能是其增加了BMSC分泌的HGF量。
【图文】：

雄性大鼠,集落,簇集,原代培养

4一5d后可以观察到明显的克隆集落，，(图1)。8一10d原代细胞90%融合，此时传代。经过4代培养，骨髓间充质干细胞在培养瓶中呈梭形漩涡状排列，似成纤维细胞样贴壁生长(图2)。骨髓内的造血干细胞等杂细胞在培养瓶中通过多次换液和传代已经逐步被去除，细胞纯化单一，可以用于实验。图1雄性大鼠骨髓问充质干细胞原代培养5d，细胞旱集落簇集生长(xZOO)图2雄性大鼠骨髓间充质干细胞第4d，细胞长梭状漩涡排列 (x100)三、大鼠肺组织病理学改变1.HE染色:阴性对照组在实验始终都表现为完整的肺泡结构，肺间质无特殊改变(图3)。注入博莱霉素后第7d，除N组外各组大鼠肺组织均出现炎症反应

肺泡炎,肺泡,情况,博莱霉素

三、大鼠肺组织病理学改变1.HE染色:阴性对照组在实验始终都表现为完整的肺泡结构，肺间质无特殊改变(图3)。注入博莱霉素后第7d，除N组外各组大鼠肺组织均出现炎症反应，I组肺泡炎评分小于B组(P<0.05)，M、B组间炎症程度没有差异。第14d，B组肺泡炎持续发展，肺泡间隔及肺泡内大量炎性细胞浸润(图4)，评分
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R563

【共引文献】