全氟已烷对大鼠肺泡巨噬细胞生物学行为的影响

发布时间：2020-06-04 10:03

【摘要】：目的 通过研究全氟己烷对肺泡巨噬细胞所分泌的各种细胞因子的蛋白质表达、凋亡和细胞周期以及吞噬功能的影响,探讨急性肺损伤时应用PFC治疗的分子作用机理及其对肺局部防御机能的影响。 方法 健康雄性Wistar大鼠放血处死后全肺灌洗获取AM,贴壁纯化。采用4种方法干预将AM分为4组:(1)正常对照(C)组:不做任何干预;(2)脂多糖(LPS)组:按10ug/ml的剂量加入LPS刺激;(3)全氟己烷(PFH)组:按30%体积比(PFH:培养液)加入的PFH;(4)脂多糖+全氟己烷(LPS+PFH)组:加入PFH和LPS。在预培养20h后重悬AM,分4组干预处理4h后,收集AM,与1%鸡红细胞悬液培育后制片,瑞氏染色观察并计算吞噬率和吞噬指数,采用单因素方差分析比较组间差异;提取各组细胞的蛋白质应用蛋白质芯片飞行时间质谱技术比较组间的蛋白质表达差异;在纯化后即用无血清培养液培养并分为4组干预24h。收集AM,应用透视电镜进行形态学观察,并联合流式细胞技术采用单因素方差分析比较各组间凋亡率和细胞周期的差异。 结果 (1)LPS组与C组、PFH组与C组及LPS组和LPS+PFH组相比较共发现有15个相对分子量的差异表达蛋白质,分别为:3343 Da、4796 Da、4968 Da、5175 Da、5546 Da、7600 Da、7918 Da、9776 Da、10934 Da、11529 Da、14853 Da(接近14849 Da)、15257 Da、15823 Da、13763 Da、14001 Da。其对应的Swiss—prot蛋白数据库中共发现了47种相应的蛋白质。(2)LPS组和LPS+PFH组的凋亡率分别明显高于C组和LPS组(10.06±1.72%/24.10±3.19% vs 1.06±0.13%/10.06±1.72%,P0.01),而PFH组与C组的凋亡率比较无显著统计学意义(2.81±0.41%vs1.06±0.13%,P0.05);细胞周期的各指标在4组间均无统计学差异(P0.05)。(3)AM的吞噬率和吞噬指数呈线性相关性关
【图文】：

.蛋白质.在芯片表面可直接被捕获，保留和纯化(亲合捕获)0.芯片表面可通过表面增强的激光解吸附和离子化《S且刀D仪进行阅读保留在芯片上的蛋白质可直接进行质谱分析。俨1比目户Poretni晰尹灿加y图7蛋白质芯片和SELDI的原理示意图

PFH组PFH十LPS组图IC组:未吞噬鸡红细胞的AM体积较大，核呈紫红色，位于中央。鸡红细胞呈梭形，有浓染的核;LPS组:可见吞噬了两个红细胞的AM;PFH组:吞噬了PFH的AM体积较大;被吞噬的PFH不被染色，，进入胞浆后呈圆形;PFH+LPs组:吞噬了PFH和鸡红细胞的AM(wright，5stain，X1000)
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R563

【参考文献】

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本文编号：2696220